XX Congreso de la Sociedad Española de Diabetes

Av Diabetol. 2009;25(Supl 1):35-111
la barrera inmunológica (uso de fármacos inmunosupresores con toxicidad
directa sobre el Is). Además, el procedimiento actual implanta los Is en el
hígado, un micromedioambiente que probablemente no genere las señales
correctas para mantener la diferenciación de un sistema celular frágil.
Así, parece necesario explorar tanto nuevas fuentes de células beta, preferiblemente
autólogas, como nuevas localizaciones del implante. Los genes
implicados en la diferenciación pancreática emergen con un patrón
secuencial específi co. El primer paso es el compromiso endodérmico y el
marcador de diferenciación fi nal de los Is es la síntesis y producción de
insulina. Los distintos tipos de células madre obtenidos de tejidos adultos
han demostrado en otros modelos tanto capacidad de diferenciación hacia
las 3 láminas endodérmicas como efectos inmunomoduladores. Su aplicación
en la DM está siendo valorada y para ello se precisan fuentes de
células madre accesibles y autólogas. Objetivos: Analizar si las células
mononucleadas (MNC) de médula ósea humana (hMO) son capaces de
anidar en el páncreas y si se induce algún cambio en la expresión génica
de este tipo celular que indique compromiso de diferenciación pancreática.
Material y métodos: Se aislaron células MNC de hMO a partir de voluntarios
sanos. Se determinó el porcentaje de linfocitos y células CD34+. Se
trasplantaron en páncreas de ratones inmunodefi cientes (SCID bg). Se
analizó la supervivencia de los animales, la presencia de pancreatitis, la
supervivencia celular (inmunohistoquímica [IHQ]) y la expresión de genes
endodérmicos y pancreáticos (RT-PCR en tiempo real [QRT-PCR]) a las 4
y 8 semanas postrasplante. Resultados: La supervivencia de los animales
fue del 94% coincidiendo con la curva de aprendizaje inicial (en los
experimentos recientes fue del 100%). Su aspecto fue saludable durante
el tiempo experimental y en ningún caso se detectó elevación de enzimas
pancreáticas (medidas en el momento del sacrifi cio). Se demostró por IHQ
la presencia de vimentina humana en los páncreas trasplantados tanto a
las 4 semanas como a las 8 semanas así como expresión de hERV. Se
detectó un aumento en la expresión de HNF1β y NKx6.1 asociada a una
disminución de NCAM. No se observó modifi cación de otros genes de la
cascada de diferenciación. Conclusiones: El páncreas es un órgano apto
para el trasplante celular, ya que hemos demostrado supervivencia de
las células humanas trasplantadas tras largos periodos de tiempo (4 y 8
semanas). El incremento, siempre constante y de forma específi ca, en la
expresión de determinados genes endodérmicos (HNF1β) y de compromiso
pancreático (NKx6.1) indica que el micromedioambiente pancreático
debe ser responsable, al menos en parte, de estos cambios. Tenemos en
marcha estudios in vivo para analizar si el trasplante intrapancreático de
este tipo de células humanas a ratones diabéticos sería capaz de modular
el curso natural de la enfermedad (DM).
P-009. LA DEFICIENCIA EN EL SUSTRATO DEL
RECEPTOR DE INSULINA 2 INCREMENTA LOS
NIVELES DE EXPRESIÓN DE INHIBIDORES DEL
CICLO CELULAR EN ISLOTES PANCREÁTICOS
S.M. Sanz-González, D. Burks
Centro de Investigación Príncipe Felipe. Valencia
Introducción: Las señales de IRS-2 son esenciales para el desarrollo
y la proliferación de las células beta pancreáticas, así como para la regulación
de la energía metabólica en los sustratos clásicos de insulina
tisulares. Objetivos: Ahondar en el mecanismo por el cual las señales
IRS-2 regulan la progresión del ciclo celular. Métodos: Hemos analizado
el comportamiento de islotes de ratones silvestres y defi cientes para
el sustrato del receptor de insulina 2 (IRS-2) –tanto normoglucémicos
como diabéticos– en relación con diferentes parámetros de ciclo celular
como son los inhibidores de las kinasas dependientes de ciclinas. Esta
comparación se ha llevado a cabo tanto por técnicas de Western blot
como por técnicas de RT-PCR a tiempo fi nal. En el primer caso, islotes
de cada condición fueron lisados en tampón Laemmli y corridos en
electroforesis, para posteriormente detectar mediante el uso de anticuerpos
la expresión de ciclina D, p18, p19, p21, p27, utilizando GADPH
como control de carga. En el caso de RT, el RNA se extrajo de 25 islotes
de cada condición –usando el kit Nucleospin XS–, y se retrotranscribió
a cDNA con la enzima Super Script II. Posteriormente se realizaron PCR
convencionales utilizando primers para los genes de interés, de nuevo se
normalizó con los niveles de expresión del housekeeping adecuado.
Resultados: Análisis por western blot de islotes de ratones silvestres y
defi cientes en IRS2 tanto normoglucémicos como diabéticos (glucemia
basal >120 mg/dL) muestran un aumento de las proteínas inhibidoras
de proliferación en los ratones defi cientes en IRS2, efecto que incrementa
aún más en el caso de ser ratones hiperglucémicos. Estas proteínas
analizadas corresponden a la familia de las INK (p18 y p19) y a la
familia de las Cip/Kip (p21 y p27). No se encuentran diferencias en los
niveles de expresión de la ciclina D1 ni de su CDK compañera, CDK4.
Se corrobora en parte estos resultados a nivel de mensajero, puesto que
se observa mayor expresión de los inhibidores p18 y p19 en RNA de
islotes de ratones defi cientes en IRS2. También analizamos la expresión
de p15 y p16, pero no encontramos niveles de expresión detectables.
Se conoce que la proteína p16 incrementa con la edad de los ratones,
siendo pues muy probablemente este el motivo de su inexistencia en
nuestro estudio, ya que los ratones analizados no tienen más de 14 semanas
de edad, puesto que mueren prematuramente a consecuencia
de la diabetes que desarrollan. Conclusiones: La ausencia de IRS2
conduce a un estado diabético en los ratones, hecho que se encuentra
acompañado de una disminución en el número de islotes pancráticos,
células beta secretadoras de insulina, que proliferan en menor medida,
en parte como consecuencia del aumento de las proteínas inhibidoras
de ciclo celular como son los inhibidores de las kinasas dependientes de
ciclinas que hemos analizado. Agradecimientos: Ciber de Diabetes y
Enfermedades Metabólicas Asociadas (CIBERDEM), Juan de la Cierva.
P-010. EFECTO CENTRAL DEL TUNGSTATO EN
LA VÍA DE LA LEPTINA: POSIBLE MECANISMO
ANTIOBESIDAD
M. Amigó-Correig
Hospital Clínic i Provincial, Barcelona
El tungstato de sodio es un novedoso y potencial agente antidiabético y
antiobesidad, que actúa sobre el gasto energético y la ganancia de peso.
Resultados previos demostraron que las acciones del tungstato dependen
de la vía de la leptina. El tratamiento de animales obesos con tungstato
modifi ca los niveles de neuropéptidos, aumentando los anorexigénicos,
y disminuyendo los orexigénicos. Además, el tratamiento con
tungstato vía icv, mostró un efecto directo de esta molécula sobre el hipotálamo,
disminuyendo tanto la ganancia de peso como la ingesta de
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