tesi dottorato fabbro.pdf - OpenstarTs - Università degli Studi di Trieste

6.3 UTILIZZO DI TRATTAMENTI CHIMICO-FISICO PER
AUMENTARE LA SENSIBILITA’DEL TEST
Come suggerito da diversi lavori sul tema, l’azione mascherante delle proteine leganti
l’Actina [Capitolo 3.2] può essere inibita tramite il riscaldamento del siero oppure
attraverso la diluizione del campione in soluzione addizionata con calcio–chelante ad
elevata concentrazione. .
Per questo motivo ogni siero preso in esame è stato testato per tre volte, una volta per
ciascun trattamento preso in considerazione:
1. Siero diluito 1:5 in PBS Tween 0,05%.
2. Siero diluito 1:5 in PBS Tween 0,05% e riscaldato per 45’a 56°C.
3. Siero diluito 1:5 in soluzione EDTA (calcio-chelante) 0,1mM in PBS Tween
0,05%
6.4 VALUTAZIONE DELLA LESIONE INTESTINALE
È stato eseguito un prelievo bioptico in tutti i pazienti celiaci appartenenti a questo studio.
La biopsia è stata eseguita in fase di esofagogastroduodenoscopia (EGDS), svolta in
sedazione o meno in base al tipo di paziente. Il prelievo è multiplo eviene effettuato al
raggiungimento della parte discendente del duodeno. Il materiale ottenuto viene posto su
un filtro millipore acetato di cellulosa e questo incluso in modo standard in un blocchetto
di paraffina. Questa procedura serve per orientare correttamente il pezzo bioptico, in modo
tale che si possano evidenziare correttamente tutti gli stati della parete. I campioni
vengono suddivisi in due parti che verranno analizzate in maniera diversa.
La prima quota di tessuto viene conservata e fissata secondo i classici sistemi utilizzati per
i tessuti e successivamente viene processata con ematossilina-eosina e impiegata per
l’esame microscopico, al fine di osservare la morfologia dei villi intestinali, delle cripte, il
rapporto villo/cripta e l’infiltrato cellulare eventualmente presente. La descrizione
istopatologica viene riassunta dai criteri di Marsh
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