本科生化实验补å 讲义 - 南方医科大学精品课程

+5 ml 95% 乙 醇 , 混 匀 , 静 置 10 分 钟离 心 5 分 钟 (4000 r / min)上 清 ( 弃 去 ) 沉 淀+ 蒸 镏 水 2 ml沸 水 浴 2 分 钟 , 溶 解 沉 淀鉴 定 方 法 1鉴 定 方 法 2白 瓷 板 孔 穴 中加 碘 试 剂 0.1ml(2 滴 ) 加 碘 试 剂 0.1ml(2 滴 )糖 原 溶 液 0.1ml(2 滴 )糖 原 溶 液 1ml+ 浓 HCl 0.2ml沸 水 浴 15 分 钟 , 冷 却+50%NaOH 0.2ml呈 色 对 比 糖 原 水 解 液 0.1ml(2 滴 ) 糖 原 水 解 液混 匀+ 班 氏 试 剂 0.2ml(4 滴 )沸 水 浴 2 分 钟 , 观 察 颜 色 变 化注 意 事 项1. 肝 糖 原 提 取 一 步 , 向 上 清 液 中 加 入 5ml95% 乙 醇 后 , 务 必 注 意 混 匀 。 由 于 上 清 液 为水 溶 液 , 比 重 大 于 95% 乙 醇 , 溶 液 分 成 两 层 。 加 之 上 清 液 已 3ml 多 , 总 量 接 近 9ml, 混 匀操 作 比 较 困 难 , 最 好 用 倾 倒 混 匀 , 也 可 用 滴 管 或 吸 量 管 吸 、 吹 混 匀 , 或 用 玻 璃 棒 搅 拌 混 匀 。2. 糖 原 中 葡 萄 糖 螺 旋 链 吸 附 碘 产 生 的 颜 色 与 葡 萄 糖 残 基 数 的 多 少 有 关 。 葡 萄 糖 残 基 在20 个 以 下 的 会 使 碘 呈 现 红 色 ,2030 个 之 间 使 碘 呈 现 紫 色 ,60 个 以 上 的 会 使 碘 呈 现 蓝 色 。淀 粉 中 分 枝 链 较 长 , 故 呈 蓝 色 , 而 肝 糖 原 分 枝 中 的 葡 萄 糖 残 基 在 20 个 以 下 ( 通 常 812 个 葡萄 糖 残 基 ), 吸 附 碘 后 呈 现 红 棕 色 。3. 糖 原 水 解 液 中 葡 萄 糖 的 鉴 定 一 步 , 加 班 氏 试 剂 不 能 过 量 , 否 则 反 应 液 呈 黑 色 浑 浊 ,观 察 不 到 应 有 的 结 果 。( 二 ) 肝 糖 原 定 量 测 定 操 作 流 程 如 下鸡 肝 0.07~0.15 g+30%KOH 1.5ml沸 水 浴 15 分 钟冷 却 , 全 部 转 入 100 ml 容 量 瓶 中加 水 至 标 线 , 仔 细 混 匀 , 此 为 糖 原 消 化 液12