本科生化实验补å 讲义 - 南方医科大学精品课程

2. 将 电 泳 胶 模 置 于 制 胶 架 中 , 梳 子 置 于 适 当 位 置 , 将 冷 却 至 65℃ 左 右 的 琼 脂 糖 溶 液 慢慢 倒 在 胶 模 上 , 厚 度 约 3 mm。 静 置 , 待 胶 凝 固 后 将 胶 模 从 制 胶 架 中 取 出 , 放 入 电 泳槽 内 , 倒 入 适 量 电 泳 缓 冲 液 ( 一 般 液 面 高 出 凝 胶 1 cm), 小 心 拔 出 梳 子 。3. 将 5μg 提 取 的 质 粒 DNA 样 品 和 酶 切 产 物 , 分 别 与 溴 酚 蓝 指 示 剂 ( 或 loading buffer)混 匀 , 加 入 凝 胶 点 样 孔 内 , 防 止 产 生 气 泡 和 样 品 溢 出 。4. 将 电 泳 槽 通 电 ,80V 恒 压 电 泳 30 分 钟 。5. 电 泳 完 毕 , 关 掉 电 泳 仪 , 小 心 取 出 凝 胶 置 于 紫 外 灯 下 观 察 结 果 。注 意 事 项 :1. 防 止 紫 外 线 对 人 皮 肤 及 眼 睛 的 损 伤 , 避 免 直 接 照 射 皮 肤 与 眼 睛 。2. EB 是 强 诱 变 剂 , 有 致 癌 性 , 操 作 时 要 带 手 套 , 防 止 污 染 。 所 有 含 有 EB 的 溶 液 在 弃置 前 应 当 进 行 净 化 处 理 。附 注 一 :实 验 所 用 的 相 关 材 料 信 息备 选 一1. 质 粒 DNA 提 取 所 用 菌 液 样 品(1) 宿 主 菌 :DH5;(2) 载 体 :pET-28a(+);(3) 插 入 片 段 基 因 : 泛 素 化 基 因 FBOX(1.6Kb)。2. 质 粒 DNA 酶 切 鉴 定(1) 所 用 的 限 制 性 内 切 酶 :EcoR I 和 Hind III;(2) 酶 切 产 物 : 插 入 片 段 (1600bp) 及 载 体 (5300bp)。备 选 二1. 质 粒 DNA 提 取 所 用 菌 液 样 品(1) 宿 主 菌 :DH5;(2) 载 体 :pMD18-T;(3) 插 入 片 段 基 因 : 抑 癌 基 因 CHD5 启 动 子 区 的 一 段 区 域 (400bp)。2. 质 粒 DNA 酶 切 鉴 定(1) 所 用 的 限 制 性 内 切 酶 :EcoR I 和 Hind III;(2) 酶 切 产 物 : 插 入 片 段 (400bp) 及 载 体 (2.7kb)。3.PCR 实 验 相 关 说 明(1)PCR 引 物 : 为 通 用 引 物 , 序 列 见 前 。(2)PCR 扩 增 片 段 大 小 为 400 多 bp。附 注 二 :质 粒 图 谱1. pET-28a(+) 载 体21