Laboratoriekursus Biologi B-niveau - KVUC

Volumen afmærkes på kolben med en pen fordampet væske erstattes med destilleret
vand (fremstillet på forhånd).
Agarose-opløsningen opvarmes til den er klar som vand og afkøles til 55 ºC.
Fremgangsmåde (se også figuren på s. 5)
Støbning af gelen.
1. Tag støbeformen til gelen og sæt gummiklodserne på enderne.
2. Placer ”kammen” i positionen nærmest enden af formen.
3. Hæld nu gelen forsigtigt ud i formen uden at der dannes luftblærer. NB! Det er
vigtigt at karret står fuldstændig vandret
4. Lad gelen størkne i ca. 20 minutter
Klargøring af gelen til elektroforese.
Når gelen er størknet fjernes gummiklodserne og kammen tages forsigtigt op så
prøvebrøndene ikke beskadiges. Gelen anbringes i elektroforesekarret og karret
fyldes op med elektroforesebuffer – gelerne skal være helt dækkede. Bemærk gelen
skal være orienteret i strømretningen (minus til plus).
Påsætning af stangardprøver (A-C), de to forældre (D og F) og fostret (E)
Med mikropipette opsuges 35L (mikroliter = 10 -6 liter) DNA prøve. Prøven afsættes
i gelens ”brønd” følg rækkefølgen A-F. Metoden kaldes ”submarine”, fordi prøverne
påsættes under væskeoverfladen. Det er vigtig ikke at stikke pipettespidsen ned i
gelen og af undgå at ryste karret efter afsætningen af prøverne. Husk også at skifte
pipettespids for hver prøve.
A: Standard DNA (syg)
B: Standard DNA (arvebærer)
C: Standard DNA (rask)
D: DNA fra moderens blodprøve
E: DNA fra fostervand eller moderkage fra fosteret
F: DNA fra faderens blodprøve
Kørsel af prøverne - elektroforesen.
Strømmen sluttes til elektroforeseapparatet via strømforsyningen. Forbind sort
ledning til sort input () og rød ledning til rød input (+). Elektroforesen kører ca. 2
timer ved 50 V spænding. Under kørslen kan man følge prøvernes vandring vha. en
farvemarkør.
39