(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel

따르는 bPI-3에 대한 DNA 백신은 최적화된 bPI-3 항원 중 하나(HN 또는 F) 또는 이들 둘 모두(HN 및 F)를 코딩
하고 발현시킬 수 있다.
다양한 발현 벡터 구조체 및 본 발명에 사용될 수 있는 bPI-3 항원을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 하기 실
시예 및 FR-A1-2751229, 보다 구체적으로 실시예 14 및 실시예 15 그리고 도 10 및 도 11에 제시되어 있다.
본 발명에 따르면, bPI-3에 대한 DNA 백신은 DMRIE-DOPE와 함께 제형화되고, HN의 신호 서열 대신 인간 tPA의
신호 서열의 삽입, 막관통 도메인을 코딩하는 HN의 뉴클레오타이드 서열의 단편과 연속된 C-말단 부분의 결실
및 HN의 상류에 토끼 베타-글로빈 유전자의 인트론 Ⅱ의 삽입에 의해 최적화된 bPI-3의 HN 항원을 코딩하는 발
현 플라스미드(예를 들면, pLF1025 실시예 7.1.2), 그리고 F의 신호 서열 대신 인간 tPA의 신호 서열의 삽입, F
의 막관통 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 단편과 연속된 C-말단 부분의 결실 및 F의 상류에 토끼 베
타-글로빈 유전자의 인트론 Ⅱ의 삽입에 의해 최적화된 bPI-3의 F 항원을 코딩하는 제2 발현 플라스미드(예를
들면, pLF1027 실시예 7.2.2)로 구성되는 것이 바람직하다.
본 발명의 대상은 돼지에서 돼지 헤르페스바이러스(PRV)에 대해 유효한 방어 면역반응을 유도할 수 있는 개선된
DNA 백신이다.
PRV 바이러스는 Alphaherpesviridae과의 일원으로, 오제스즈키병의 원인이 되는 바이러스이다(Sawitzky D.,
Arch. Virol. Suppl., 1997, 13, 201-206).
당단백질 gB, gC 및 gD을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 공지되어 있으며, 수탁 번호 M17321. AF158090 및
AF086702 하에 GenBank 데이터베이스로부터 입수 가능하다.
PRV에 대한 DNA 백신은 본 발명에 따르는 면역 보강제, 보다 구체적으로는 DMRIE, 바람직하게는 DMRIE-DOPE와
함께 제형화되는 것이 바람직하다. 이것은 선택적으로 돼지 GM-CSF의 부가(Inumaru S. 및 Takamatsu H.,
Immunol. Coll. Biol., 1995, 73, 474-476) 또는 적어도 하나의 PRV 항원의 최적화 중 하나, 혹은 궁극적으로
돼지 GM-CSF의 부가 및 적어도 하나의 PRV 항원의 최적화와 조합될 수 있다.
돼지 GM-CSF의 부가는 돼지 GM-CSF 폴리펩타이드를 백신 조성물에 혼입하거나 (예를 들면, 수탁 번호 D21074 하
에 GenBank 데이터베이스로부터 입수 가능한) 돼지 GM-CSF를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 생체내 발현
벡터, 바람직하게는 플라스미드에 삽입함으로써 수행될 있다. 돼지 GM-CSF를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은
PRV 항원(들)을 코딩하는 유전자(들)가 삽입된 것과는 상이한 제2 발현 플라스미드(예를 들면, pLF1033 실시예
14)로 삽입하는 것이 바람직하다.
PRV로부터 유래되는 항원의 최적화는 "신호" 서열, 특히 인간 기원의 tPA 신호 서열에 의한(GenBank 수탁 번호
NM_000930), 당단백질 gB 및/또는 당단백질 gC 및/또는 당단백질 gD의 신호 펩타이드 서열의 치환, 및/또는 gB
및/또는 gC 및/또는 gD의 막관통 도메인을 코딩하는 DNA 단편의 결실에 의해 수행된다. 이들 당단백질 중 하나
의 막관통 도메인을 코딩하는 DNA 단편의 결실은 연속된 C-말단 부분에 의해 달성되는 것이 바람직하다. 따라
서, 본 발명에 따르는 PRV에 대한 DNA 백신은 최적화된 PRV 항원 중 하나(gB, gC 또는 gD), 혹은 이들 중 둘 또
는 셋 모두, 즉 최적화된 gB, 최적화된 gC 및 최적화된 gD를 코딩하고 발현시킬 수 있다.
다양한 발현 벡터 구조체 및 본 발명에 사용될 수 있는 PRV 항원을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 하기 실시
예 및 FR-A1-2751224, 보다 구체적으로 실시예 8 및 실시예 9 그리고 도 3 및 도 5에 제시되어 있다.
본 발명에 따르면, PRV에 대한 DNA 백신은 DMRIE-DOPE와 함께 제형화되고, 막관통 도메인을 코딩하는 뉴클레오
타이드 서열 단편과 연속된 C-말단 부분의 결실에 의해 최적화된 PRV의 gB 항원을 코딩하는 발현 플라스미드(예
를 들면, pSB102 실시예 8.1.2), 막관통 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 단편과 연속된 C-말단 부분의
결실에 의해 최적화된 PRV의 gC 항원을 코딩하는 제2 발현 플라스미드(예를 들면, pSB104 실시예 8.2.2), 그리
고 막관통 도메인을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 단편과 연속된 C-말단 부분의 결실에 의해 최적화된 PRV의
gD 항원을 코딩하는 제3 발현 플라스미드(예를 들면, pSB106 실시예 8.3.2)로 구성되는 것이 바람직하다.
본 발명의 대상은 또한 돼지에서 돼지 재생성 호흡 증후군 바이러스(PRRSV)에 대항해 유효한 방어 면역반응을
유도할 수 있는 개선된 DNA 백신이다.
PRRSV 바이러스는 Arteriviridae과의 일원인 아르테리바이러스이다(Murtaugh et al., Arch. Virol., 1995,
140, 1451-1460).
오픈 리딩 프레임 ORF3, ORF5 및 ORF6에 의해 코딩되는 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 공지되어 있
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등록특허 10-0820893