(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel

PRRSV Lelystad ORF6 유전자는 173개 아미노산의 단백질을 코딩한다.
9.3.2 pLF1014: 벡터 pAB110 내로 클로닝된 ORF6 유전자(절단된 형태)
막관통 도메인 및 C-말단 도메인에 대해 결실된 ORF6 유전자를 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을 이용해 pLF1013
주형(실시예 9.3.1)으로부터 PCR 반응시켜 합성하였다:
LF025(30량체; SEQ ID NO 75)
LF026(33량체; SEQ ID NO 76)
BamHI을 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 390 bp의 DNA 단편을 BamHI을 이용해 pAB110(실시예 2)을 분해
시켜 얻은 5105 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 약 5495 bp 크기의 pLF1014를 제작하였다.
이렇게 변형된 PRRSV Lelystad ORF6 유전자(tPA Δ[TM-Cter])는 154개 아미노산의 단백질을 코딩한다.
실시예 10: 다양한 형태의 돼지 재생성 호흡 증후군 바이러스(PRRSV) American 균주 ATCC VR-2332 항원을 코딩
하는 플라스미드
PRRSV ORF3, ORF5 및 ORF6 단백질을 코딩하는 유전자는 수탁 번호 VR-2332 하에 ATCC에 기탁되어 있는
American 균주(M. Murtaugh et al., Arch Virol. 1995, 140, 1451-1460)의 바이러스 RNA로부터 RT-PCR하여 얻
었다.
10.1 다양한 형태의 PRRSV VR-2332 균주 ORF3을 코딩하는 플라스미드
10.1.1 pLF1015: 벡터 pVR1012 내로 클로닝된 ORF3 유전자(천연 형태)
VR-2332 균주 ORF3 유전자의 cDNA를 프라이머 LF038을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고, 하기 올
리고뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:
LF037(30량체; SEQ ID NO 77)
LF038(30량체; SEQ ID NO 78)
EcoRV 및 XbaI을 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 769 bp 크기의 DNA 단편을 EcoRV 및 XbaI을 이용해
pVR1012(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4900 bp의 단편에 결찰시켜 약 5669 bp 크기의 플라스미드 pLF1015를 제작
하였다.
PRRSV 균주 VR-2332 ORF3 유전자는 254개 아미노산의 단백질을 코딩한다.
10.2 다양한 형태의 PRRSV VR-2332 균주 ORF5를 코딩하는 플라스미드
10.2.1 pLF1017: 벡터 pVR1012 내로 클로닝된 ORF5 유전자(천연 형태)
VR-2332 균주 ORF5 유전자의 cDNA를 프라이머 LF030을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고, 하기 올
리고뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:
LF029(30량체; SEQ ID NO 79)
LF030(30량체; SEQ ID NO 80)
EcoRV 및 BglⅡ를 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 약 607 bp의 DNA 단편을 EcoRV 및 BglⅡ를 이용해
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및
및
등록특허 10-0820893