(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel

유도하기에 충분히 유효한 항원은 아니다. 따라서, 면역반응의 개선이 요구된다.
DNA 백신의 다양한 투여 경로(복막내, 정맥내, 근육내, 피하, 피부내, 점막 등)가 제안되었으며, 다양한 투여
수단, 특히 DNA로 코팅되어 백신 접종하고자는 대상의 피부 세포를 관통하도록 투사되는 금 입자(Tang et al.,
Nature 1992, 356, 152-154) 및 피부와 및 그 하부 조직의 세포 모두로의 트랜스펙션을 가능하게 하는 액체 제
트 주사기(Furth et al., Analytical Bioch., 1992, 205, 365-368)가 제안되었다.
DNA의 시험관내 트랜스펙션을 위해서는 화학적 물질이 사용되어 왔다:
A/ - 양이온성 지질.
양이온성 지질은 4개의 하위 그룹으로 분류된다:
1) 4급 암모늄을 함유하는 양이온성 지질, 예를 들면 DOTMA(디올레오일옥시프로필트리메틸암모늄, Gibco사에
의해 상품명 Lipofectine으로 제조됨), DOTAP(트리메틸-2,3-(옥타데크-9-엔오일옥시)-1-프로판암모늄;
Gregoriadis et al., FEBS Letters, 1997, 402, 107-110), DMRIE(N-(2-하이드록시에틸)-N,N-디메틸-2,3-비스
(테트라데실옥시)-1-프로판암모늄; WO-A-9634109), DLRIE(N-(2-하이드록시에틸)-N,N-디메틸-2,3-비스(도데실옥
시)-1-프로판암모늄; Felgner et al., Ann. N Y Acad. Sci., 1995, 772, 126-139).
4급 암모늄을 함유하는 이러한 양이온성 지질은 대안적으로 DOPC(디올레오일포스파티딜콜린) 또는 DOPE(디올레
오일포르파티딜에탄올아민)과 같은 부가의 천연 지질과 조합될 수 있다(J. P. Behr, Bioconjugate Chemistry
1994, 5, 382-389).
2) 리포아민, 예를 들면 DOGS(디옥타데실아미도글리실스퍼민, Promega사에 의해 상품명 Transfectam으로 제조
됨; Abdallah et al., Biol. Cell., 1995, 85, 1-7), DC-Chol(디메틸아미노에탄-카바모일-콜레스테롤; Gao 및
Huang, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991, 179, 280-285), BGSC(비스-구아니딘-스퍼미딘-콜레스테롤),
BGTC(비스-구아니딘-트렌콜레스테롤)(Vigneron et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 9682-9686).
3) 4급 암모늄염 및 리포아민을 함유하는 양이온성 지질, 예를 들면 DOSPA(N,N-디메틸-N-(2-(스퍼민카르복스아
미도)에틸)-2,3-비스-(디올레오일옥시)-1-프로판이미듐, 펜타하이드로클로라이드, Gibco사에 의해 상품명
LipofectAmine (R)
으로 시판됨; Hawley-Nelson et al., Focus 1993, 15, 73-79), GAP-DLRIE(N-(3-아미노프로필)-
N,N-디메틸-2,3-비스(도데실옥시)-1-프로판암모늄; Wheeler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93,
11454-11459; Norman et al., Vaccine 1997, 15, 801-803).
4) 아미딘 염을 함유하는 지질, 예를 들면 ADPDE, ADODE(Ruysschaert et al., Biochem. Biophys. Res.
Commun., 1994, 203, 1622-1628).
B/ - 폴리머, 예를 들면 SuperFect(활성화 덴트리머(dendrimer) 분자, Qiagen사에 의해 제조됨; Xu et al.,
Mol. Genet. Metab., 1998, 64, 193-197), 및
C/ - 생화학 제제, 예를 들면 독소, 특히 콜레라 독소.
이들 화합물의 일부는 보다 완화된 결과를 가져오는 DNA 백신의 제형화에 사용되었다. 시험관내 트랜스펙션 분
야에서의 지식은 궁극적인 목적이 방어 면역반응을 일으키는 것인 DNA 백신 접종에는 적용될 수 없다. 시험관
내 트랜스펙션을 촉진하는 것으로 알려진 화합물로는 유효한 면역 방어효과의 유도에 있어 부정적인 효과가 관
찰되었다. 몇몇 제형 화학적 물질은 용량이 큰 경우 트랜스펙션된 세포에 대해 독성이다.
이미 언급된 Etchart의 연구에서(Etchart et al., J. Gen. Virol., 1997, 78, 1577-1580), DOTAP의 사용은 DNA
백신이 비강내 경로를 통해 투여되는 동안 면역 보강제로서의 효과를 나타내지 못하는 반면, 경구 투여를 통하
는 경우에는 면역 보강제로서 효과를 나타낸다. 또한, DOTAP는 비강내 경로를 통해 투여된 마우스 모델에 대한
인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 코딩하는 DNA 백신에 사용되었으나(Ban et al., Vaccine 1997, 15,
811-813), DOTAP의 첨가는 면역반응을 억제하였다. 근육내 경로를 통해 투여된 마우스 모델에 대한 B형 간염
바이러스의 표면 단백질(S)을 코딩하는 DNA 백신에 DC-chol 또는 DOTAP/DOPE를 사용한 경우 항체 반응이 향상된
반면, 리포펙틴(또는 DOTMA)의 사용은 이러한 항체 반응을 향상시키지 못했다(Gregoriadis et al., FEBS
Letters 1997, 402, 107-110). 또한, DC-chol/DOPE는 마우스 모델에 대한 인간 면역 결핍 바이러스(HIV, Env
단백질)에 대항하는 DNA 백신에 사용되었으나, 이때 근육내 경로를 통한 투여는 보다 효과적인 면역반응을 유도
한 반면, 피하 또는 피부내 경로를 통한 투여는 면역반응을 증가시키지 못했다(Ishii et al., AIDS Res. Hum.
Retro., 1997, 13, 1421-1428).
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