(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel

NotI 및 BglⅡ를 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 약 1140 bp의 DNA 단편을 NotI 및 BglⅡ을 이용해 pLF999
(실시예 2)를 분해시켜 얻은 5642 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1023(약 6787 bp)을 제작하였다.
이렇게 변형된 BVDV-2 균주 890의 E2 유전자(β-글로빈 tPA-E2 Δ[TM-Cter])는 405개 아미노산의 단백질을 코딩
한다.
6.2 다양한 형태의 BVDV-2 890 균주의 E0을 코딩하는 플라스미드
6.2.1 pLF1030: 벡터 pVR1012 내로 클로닝된 E0 유전자(천연 형태)
890 균주의 E0 유전자의 cDNA를 프라이머 LF065를 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고 하기 올리고뉴
클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:
LF064(39량체; SEQ ID NO 43)
LF065(39량체; SEQ ID NO 44)
SalI 및 BamHI을 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 약 768 bp의 DNA 단편을 SalI 및 BamHI을 이용해 pVR1012
(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4866 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1030(약 5639 bp)을 제작하였다. BVDV-
2 균주 890의 E0 유전자는 253개 아미노산의 단백질을 코딩한다.
ATG 코돈을 올리고뉴클레오타이드 LF064의 서열에 도입하여 상응하는 재조합 E0 폴리펩타이드의 번역을 개시시
켰다.
6.2.2 pLF1031: 벡터 pLF999 내로 클로닝된 E0 유전자(β-글로빈 tPA-E0 형태)
E0 유전자를 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을 이용해 pLF1030 주형(실시예6.2.1)으로부터 PCR 반응시켜 합성하
였다:
LF066(42량체; SEQ ID NO 45)
LF067(39량체; SEQ ID NO 46)
NotI 및 BglⅡ를 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 약 770 bp 크기의 DNA 단편을 NotI 및 BglⅡ를 이용해
pLF999(실시예 2)를 분해시켜 얻은 5642 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1031(약 6417 bp)을 제작하였다.
이렇게 변형된 BVDV-2 균주 890의 E0 유전자(β-글로빈 tPA-E0)는 283개 아미노산의 단백질을 코딩한다.
실시예 7: 다양한 형태의 소 파라인플루엔자 바이러스 타입 3(bPI-3) 항원을 코딩하는 플라스미드
bPI-3 바이러스의 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 및 융합(F) 항원을 코딩하는 유전자는 Reisinger SF-4 균주
(수탁 번호 VR-281 하에 ATCC로부터 입수 가능)의 바이러스 RNA로부터 RT-PCR하여 얻었다.
7.1 다양한 형태의 bPI-3 SF-4 균주의 HN을 코딩하는 플라스미드
7.1.1 pLF1024: 벡터 pVR1012 내로 클로닝된 HN 유전자(천연 형태)
SF-4 균주의 HN 유전자의 cDNA를 프라이머 LF048을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고, 하기 올리고
뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:
LF047(39량체; SEQ ID NO 47)
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및
및
등록특허 10-0820893