(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel
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증폭시켰다:<br />
SB225(39량체; SEQ ID NO 21)<br />
SB226(33량체; SEQ ID NO 22)<br />
증폭 산물(1029 bp)은 효소 EcoRV 및 BglⅡ를 이용해 분해하고, EcoRV 및 BglⅡ으로 사전 분해된 벡터 pA<strong>B1</strong>10<br />
(실시예 2) 내로 클로닝하여 약 6071 bp 크기의 플라스미드 pS<strong>B1</strong>17을 제작하였다.<br />
상기 gD 유전자의 tPA Δ[TM-Cter] 형태는 BHV-1 gD 당단백질의 세포외 도메인을 함유하는 368개 아미노산의 당<br />
단백질을 코딩한다.<br />
실시예 4: 다양한 형태의 소 호흡기합포체바이러스(BRSV) 항원을 코딩하는 플라스미드<br />
BRSV 바이러스의 F 및 G 항원을 코딩하는 유전자는 Snook 균주(Thomas et al., Research in Vet. Science,<br />
<strong>19</strong>82, 33, 170-182)의 바이러스 RNA로부터 RT-PCR하여 얻었다. BRSV A 5<strong>19</strong>08 균주(ACCT 번호 VR-794)를 이용<br />
할 수도 있다.<br />
4.1 다양한 형태의 BRSV-F를 코딩하는 플라스미드<br />
4.1.1 pS<strong>B1</strong>07: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 F 유전자(천연 형태)<br />
BRSV Snook 균주의 F 유전자를 하기 프라이머를 이용하고 주형으로서 바이러스 RNA를 이용한 RT-PCR을 통해 증<br />
폭시켰다:<br />
SB210(34량체; SEQ ID NO 23)<br />
SB211(35량체; SEQ ID NO 24)<br />
1739 bp 크기의 증폭 산물을 PstI 및 BamHI을 이용해 분해하고, 효소 PstI 및 BamHI으로 사전 분해된 벡터<br />
pVR10<strong>12</strong>(실시예 2) 내로 클로닝하여 약 6583 bp 크기의 플라스미드 pS<strong>B1</strong>07을 제작하였다.<br />
상기 BRSV 바이러스의 F 유전자는 574개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
4.1.2 pS<strong>B1</strong>08: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 F 유전자(Δ[TM-Cter] 형태)<br />
BRSV Snook 균주의 F 유전자의 절단된 형태는 하기 프라이머를 이용하고 주형으로서 바이러스 RNA를 이용한 RT-<br />
PCR을 통해 증폭하였다:<br />
SB210(SEQ ID NO 23) 및<br />
SB2<strong>12</strong>(39량체; SEQ ID NO 25)<br />
증폭 산물(1581 bp)을 효소 PstI 및 BamHI을 이용해 분해하고, PstI 및 BamHI으로 사전 분해된 벡터 pVR10<strong>12</strong><br />
(실시예 2) 내로 클로닝하여 약 6430 bp 크기의 플라스미드 pS<strong>B1</strong>08을 제작하였다.<br />
상기 BRSV 바이러스의 F 유전자의 절단된 형태는 BRSV F 당단백질의 세포외 도메인을 함유하는 523개 아미노산<br />
의 당단백질을 코딩한다.<br />
4.1.3 pS<strong>B1</strong>14: 벡터 pA<strong>B1</strong>10 내로 클로닝된 F 유전자(Δ[TM-Cter] 형태)<br />
BRSV Snook 균주의 F 유전자의 tPA Δ[TM-Cter] 형태는 하기 프라이머를 이용하고 주형으로서 바이러스 RNA를<br />
이용한 RT-PCR을 통해 증폭하였다:<br />
- 21 -<br />
및<br />
및<br />
등록특허 10-0820893
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