(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel
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PB5<strong>12</strong>(57량체; SEQ ID NO 10)<br />
이렇게 제작된 플라스미드는 약 7154 bp의 크기를 가지며 pPB281이라 칭하였다. BHV-1의 절단된 gB 유전자는<br />
759개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
3.1.3 pS<strong>B1</strong>15: 벡터 pA<strong>B1</strong>10 내로 클로닝된 gB 유전자(tPA Δ[TM-Cter] 형태)<br />
BHV-1 gB 유전자의 tPA Δ[TM-Cter] 형태를 하기 프라이머를 이용해 주형 pPB281(실시예 3.1.2)로부터 PCR하여<br />
증폭시켰다:<br />
SB221(39량체; SEQ ID NO 11)<br />
SB222(33량체; SEQ ID NO <strong>12</strong>)<br />
증폭 산물(2088 bp)을 EcoRV 및 BglⅡ로 분해하고, EcoRV 및 BglⅡ로 사전 분해된 벡터 pA<strong>B1</strong>10(실시예 2) 내에<br />
클로닝하여 약 7154 bp 크기의 플라스미드 pS<strong>B1</strong>15를 제작하였다.<br />
gB 유전자의 tPA Δ[TM-Cter] 형태는 BHV-1 gB 당단백질의 세포외 도메인을 함유하는 729개 아미노산의 당단백<br />
질을 코딩한다.<br />
3.2 다양한 형태의 BHV-1 gC를 코딩하는 플라스미드<br />
3.2.1. pPB264: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 gC 유전자(천연 형태)<br />
완전한 BHV-1 gC 유전자를 함유하는 BamHI-HindⅢ 단편을 서던 브롯으로 동정하고 벡터 pBluescript SK+ 내로<br />
클로닝하였다. 이렇게 얻어진 플라스미드를 pPB287로 지정하였다.<br />
이어서, 플라스미드 pPB287을 NcoI-BssSI을 이용해 분해하였다. 1492 bp 크기의 분해 단편이 얻어졌다. 이것<br />
을 NcoI 및 XbaI으로 사전 분해된 플라스미드 pLitmus 28(New England Biolabs, Inc., Beverly, Ma, USA)에 하<br />
기 올리고뉴클레오타이드의 짝짓기에 의해 얻어진 합성 DNA 단편과 결찰시켜 중간체 플라스미드 pPB290을 제작<br />
하였다:<br />
PB507(37량체; SEQ ID NO 13)<br />
PB508(37량체; SEQ ID NO 14)<br />
PstI 및 XbaI으로 pPB290을 분해시켜 얻은 1554 bp의 단편을 PstI 및 XbaI로 사전 분해된 벡터 pVR10<strong>12</strong>(실시예<br />
2) 내로 클로닝하여 약 6427 bp 크기의 플라스미드 pB264를 제작하였다. BHV-1 gC 유전자는 508개 아미노산의<br />
단백질을 코딩한다.<br />
3.2.2 pPB292: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 gC 유전자(Δ[TM-Cter] 형태)<br />
BHV-1 gC 유전자의 절단된 형태는 PstI 및 XbaI으로 사전 분해된 플라스미드 pVR10<strong>12</strong>(실시예 2)에 하기의 DNA<br />
단편 3개를 결찰시켜 얻었다.<br />
(a) PstI 및 XhoI를 이용해 pPB264(실시예 3.2.1)를 분해시켜 얻은 1035 bp의 단편,<br />
(b) XhoI 및 BanI을 이용해 pPB264를 분해시켜 얻은 350 bp의 단편, 및<br />
(c) 올리고뉴클레오타이드 PB513 및 PB514의 짝짓기에 의해 얻어진 43 bp의 합성 단편.<br />
- <strong>19</strong> -<br />
및<br />
및<br />
등록특허 10-0820893
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