(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel
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5.1 다양한 형태의 BVDV-1 Osloss 균주의 E0을 코딩하는 플라스미드<br />
5.1.1 pLF1028: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 E0 유전자(천연 형태)<br />
Osloss 균주의 E0 유전자의 상보적인 DNA(cDNA)를 프라이머 LF051을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성<br />
하고, 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:<br />
LF050(36량체; SEQ ID NO 31)<br />
LF051(40량체; SEQ ID NO 32)<br />
SalI 및 BamHI을 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 765 bp 크기의 DNA 단편을 SalI 및 BamHI을 이용해<br />
pVR10<strong>12</strong>(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4866 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1028(약 5636 bp)을 제작하였다.<br />
BVDV-1 균주 Osloss의 E0 유전자는 252개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
ATG 코돈을 올리고뉴클레오타이드 LF050의 서열에 도입하여 상응하는 재조합 E0 폴리펩타이드의 번역을 개시시<br />
켰다.<br />
5.1.2 pLF1029: 벡터 pLF999 내로 클로닝된 E0 유전자(β-글로빈 tPA-E0 형태)<br />
E0 유전자를 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을 이용해 pLF1028 주형(실시예5.1.1)로부터 PCR 반응시켜 합성하였<br />
다:<br />
LF052(39량체; SEQ ID NO 33)<br />
LF053(40량체; SEQ ID NO 34)<br />
NotI 및 BglⅡ를 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 약 770 bp 크기의 DNA 단편을 NotI 및 BglⅡ을 이용해<br />
pLF999를 분해시켜 얻은 5642 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1029(약 6417 bp)를 제작하였다.<br />
이렇게 변형된 BVDV-1 균주 Osloss의 E0 유전자(β-글로빈 tPA-E0)는 283개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
5.2 다양한 형태의 BVDV 타입1 Osloss 균주의 E2를 코딩하는 플라스미드<br />
5.2.1 pLF1020: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 E2 유전자(천연 형태)<br />
Osloss 균주의 E2 유전자의 cDNA를 프라이머 LF040을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고 하기 올리<br />
고뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭하였다:<br />
LF039(33량체; SEQ ID NO 35)<br />
LF040(36량체; SEQ ID NO 36)<br />
SalI 및 BglⅡ을 이용해 PCR 산물을 분해시켜 얻은 <strong>12</strong>35 bp 크기의 DNA 단편을 SalI 및 BglⅡ을 이용해<br />
pVR10<strong>12</strong>(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4860 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1020(약 6100 bp)을 제작하였다.<br />
BVDV-1 균주 Osloss의 E2 유전자는 409개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
ATG 코돈을 올리고뉴클레오타이드 LF039의 서열에 도입하여 상응하는 재조합 E2 폴리펩타이드의 번역을 개시시<br />
켰다.<br />
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및<br />
및<br />
및<br />
등록특허 10-0820893
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