(19) 대한민국특허청(KR) (12) 등록특허공보(B1) - Questel
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이렇게 변형된 SIV H3N2 HA 유전자(토끼 β-글로빈 유전자의 인트론 Ⅱ, tPA Δ[TM-Cter])는 538개 아미노산의<br />
단백질을 코딩한다.<br />
<strong>12</strong>.2 다양한 형태의 SIV H3N2 균주 NA을 코딩하는 플라스미드<br />
<strong>12</strong>.2.1 pLF1007: 벡터 pVR10<strong>12</strong> 내로 클로닝된 NA 유전자(천연 형태)<br />
H3N2 균주의 NA 유전자의 cDNA를 프라이머 LF016을 이용해 상응하는 바이러스 RNA로부터 합성하고, 하기 올리고<br />
뉴클레오타이드 쌍을 이용한 PCR 반응을 통해 증폭시켰다:<br />
LF015(30량체; SEQ ID NO 99)<br />
LF016(30량체; SEQ ID NO 100)<br />
EcoRV 및 XbaI를 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 1414 bp 크기의 DNA 단편을 EcoRV 및 XbaI을 이용해<br />
pVR10<strong>12</strong>(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4900 bp의 단편에 결찰시켜 약 6314 bp 크기의 플라스미드 pLF1007을 제작<br />
하였다.<br />
SIV H3N2 NA 유전자는 469개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
<strong>12</strong>.2.2 pLF1008: 벡터 pLF999 내로 클로닝된 NA 유전자(변형된 형태)<br />
막관통 도메인 및 C-말단 도메인에 대해 결실된 NA 유전자를 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을 이용해 pLF1005<br />
주형(실시예 <strong>12</strong>.2.1)으로부터 PCR 반응시켜 합성하였다:<br />
LF017(33량체; SEQ ID NO 101)<br />
LF018(33량체; SEQ ID NO 102)<br />
BamHI을 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 <strong>12</strong>21 bp의 DNA 단편을 BamHI을 이용해 pLF999(실시예 2)를 분<br />
해시켜 얻은 5678 bp의 단편에 결찰시켜 약 6899 bp 크기의 플라스미드 pLF1008을 제작하였다.<br />
이렇게 변형된 SIV H3N2 NA 유전자(토끼 β-글로빈 유전자의 인트론 Ⅱ, tPA Δ[TM-Cter])는 431개 아미노산의<br />
단백질을 코딩한다.<br />
실시예 13: 소 GM-CSF를 코딩하는 플라스미드<br />
소 GM-CSF 유전자의 cDNA를 소 혈액 단핵화 세포의 세포 RNA로부터 합성하고, 하기 올리고뉴클레오타이드 쌍을<br />
이용해 PCR 반응하여 증폭시켰다:<br />
LF054(36량체; SEQ ID NO 103)<br />
LF055(34량체; SEQ ID NO 104)<br />
SalI 및 BglⅡ를 이용해 상기 PCR 산물을 분해시켜 얻은 437 bp의 DNA 단편을 SalI 및 BglⅡ를 이용해<br />
pVR10<strong>12</strong>(실시예 2)를 분해시켜 얻은 4860 bp의 단편에 결찰시켜 플라스미드 pLF1032(약 5297 bp)를 제작하였다.<br />
소 GM-CSF 유전자는 143개 아미노산의 단백질을 코딩한다.<br />
실시예 14: 돼지 GM-CSF를 코딩하는 플라스미드<br />
돼지 GM-CSF 유전자의 cDNA를 돼지 혈액 단핵화 세포의 세포 RNA로부터 합성하고, 하기 올리고뉴클레오타이드<br />
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및<br />
및<br />
및<br />
등록특허 10-0820893
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