Fütterungsbedingte mikrobielle Zusammensetzung von Rinderkot ...

3. Methodik und Vorversuche 7
Der Einfluss der Fütterung wird auch im Hinblick auf die pilzliche Biomasse (Abb.
1) untersucht und als vergleichende Größe der Ergosterolgehalt bestimmt. Die Methode
von Djajakirana et al. (1996) bzw. Joergensen et al. (2000) mit Ethanolextraktion
lieferte keine Messergebnisse an der HPLC. Auch verschiedene Extraktionsverhältnisse
(1:200, 1:100, 1:50) sowie Zentrifugation der Extrakte führten zu keiner Verbesserung.
Durch Verunreinigungen der Extrakte zeigten die Chromatogramme keine
integrierbaren Ergosterolpeaks. Die Extraktion mit Petrolether nach Zelles et al. (1987)
hingegen führte zum Erfolg und wurde für Rinderkot adaptiert. (Kapitel 4.2.3.)
Abb. 1a, b Pilzhyphen und -fruchtkörper auf Rinderkot nach 14 Tagen bei 25 °C
3.3 Aminozuckerbestimmung
Im Boden gelten Aminozucker als mikrobielle Residuen (Amelung, 2001; Amelung
et al., 2008). Muraminsäure ist ein Zellwandbestandteil von Bakterien. Glucosamin ist
ebenfalls ein Bestandteil der Bakterienzellwand, daneben kommt es in den Zellwänden
vieler Pilze vor. Aus dem Verhältnis von Muraminsäure und Glucosamin lässt sich das
Bakterien-Pilzverhältnis bestimmen (Engelking et al., 2007). Die Herkunft von Galacto-
samin ist nicht geklärt, es wird aber angenommen, dass das meiste Galactosamin im
Boden aus Bakterien stammt. Über die Herkunft von Mannosamin ist wenig bekannt.
Die Probenaufbereitung für die Aminozuckermessung mittels HPLC erfolgte
zunächst nach Zhang und Amelung (1996) und schließlich nach Appuhn et al. (2004).
Die erste Methode enthielt mehrere Aufreinigungsschritte und sollte für möglichst reine,
leicht messbare Probenextrakte garantieren. Dieser Effekt war im Vergleich zur zweiten
Methode jedoch gering. Zudem ergab Letztere höhere Aminozuckergehalte und erwies
sich als anwenderfreundlicher, deshalb wurde sie für die Kotproben favorisiert (Kapitel
4.2.4).