CIENCIA - Revista hispano-americana de Ciencias puras y aplicadas

CIENCIA
propiedades físicas y qUlmlcas de las partículas
aisladas y purificadas del virus MEF-I.
La purificación del virus se llevó a cabo en
seis etapas combinando procedimientos físicos y
químicos, y como corolario de estudios previos
realizados por Bachrach y Schwerdt (2, 3) con la
cepa Lansing utilizando cuerda espinal de ratas
algodoneras infectadas con el virus. La técnica
más reciente es la siguiente: Lotes de fluido de
cultivo de células de rijión de mono en cantidades
de 1 a 30 1 se ajustan a pH 4, a 4° e inmediatamente
se precipita el virus con metanol,
enfriado previamente a-50°' a una concentración
~inal de alcohol de 15%. El precipitado se
separa por filtración a través de una capa de
celita que adsorbe el virus y se eluye con solución
1 M de NaCl a pH 9. El eluado conteniendo
el virus se emulsiona dos veces con N­
butanol para extraer lípidos y desnaturalizar
proteínas no asociadas con el virus. Después, el
virus se sedimenta y clarifica por medio de un
ciclo de ultracentrifugación alterna. El sedimento
se resuspende en solución salina isotónica regulada
a pH 7,5 con fosfato disódico y se incuba
a 37° por l h con ribonucleasa cristalina y desoxiribonucleasa
a una concentración final de
2 Ilg/ml de cada una de las enzimas. El virus así
tratado se somete a otro ciclo de ultracentrifugación
diferencial. La concentración de virus en
este punto, es de 1000 a 40000 veces más grande
que la del fluido del culti"vo. original.
letales por mI. Ahora se utiliza un método mucho
m;ís sensible y exacto elaborado por Dulbecco
(12) Y conocido como la técnica de pla­
GIS. La infectividad se expresa como el nll\11ero
de unidades fomudoras de placas por mI.
Los cultivos para esta determinación se preparan
de acuerdo con el método de Youngner (34).
La identificación de la partícula física con la
cual está asociada la infectividad del virus se
determinó por medio de una técnica especial de
microscopía electrónica analítica ideada por Backus
y Williams (4). La técnica consiste primero
en la vaporización de microgotas de una mezcla
del concentrado de virus y partículas de latex
de concentración conocida, sobre el porta rejillas
cubiertas con película de colodión. Después
se deja secar al aire, se sombrea con uranio y se
observa en el microscopio electrónico. Es posible
por este método calcular la concentración de
cualquier partícula característica por medio de
la relación entre el nlllnero de estas partículas
y el de las de latex de referencia. Asimismo, se
puede obtener la relación entre infectividad y
la presencia de cualquier partícula característica.
Los siguientes cuadros resumen los resultados
obtenidos por este método:
En la Tabla 1 se presenta una comparación
de los resultados obtenidos con las cepas Lansing
y MEF-l del virus de poliomielitis purificado
a partir de SNC y cultivo de tejidos respectivamente.
Se observará que en ei caso del
VirUS MEF-l propagado en células de ri¡lón de
TABLA 1
..
ESTUDIO CO~IPARATlVO DE CONCENTRADOS PURIFICADOS DE VIRUS LASSING y MEF·I
Rendimiento
Infectividad específica
Partícula física por unidad
infecciosa
Gramos de proteína por
partícula física
Lansing (SNC)·
MEF-I (FCT)t
1,5 mg proteína/Kg
0,1 mg proteína/I
2 X 10-1' g ••
1,6 X lO-u g
proteína por LD""
proteína por PFU
21 000 ± 4000 por
1000 ± !íOO/PFUtt
LDro
10 X 10- 11 1,4 X 10- 11
• Concentrado de virus Lansing purificado de SNC de ratas algodoneras infectadas .
•• Determinado por inyección intracerebral en ratas.
t Concentrado de virus MEF·} purificado de fluido de cultivo de tejidos de células de riñón de mono.
tt Determinación de placas sobre monocapas de células epiteliales de riñón de mono.
En estudios anteriores relacionados con la purificación
de virus Lansing' de tejido nervioso
de rata, la infectividad durante el curso de purificación
se determinaba por inyección intracerebral
del material en ratas algodoneras, y se
expresaba en términos del número de 50% dosis
mono se obtuvo una pureza relativa de virus
aproximadamente 7 veces mayor que en el caso
de la cepa Lansing propagada por inyección intracerebral
de ratas algodoneras. Es también de
mucho interés el hacer notar que estos investigadores
encontraron eh estudios de microscopía
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