Rapport d'activités 2004 - FNR

01/04/04
FNR
Allergènes recombinants modifiés dans un but d’immunothérapie.
Façonnage et analyse fonctionnelle à l’aide d’un système in vitro.
Centre de Recherche Public Santé
Personne(s) de contact: François Hentges, Laboratoire d’immunogénétique et d’allergologie, CRP Santé
Adresse e-mail: Hentges.francois@chl.lu
Partenaire(s): Centre Hospitalier de Luxembourg, Laboratoire National de Santé
Durée: 1 er janvier 2003 – 31 décembre 2005
Contribution FNR: 490.000 €
Les allergènes majeurs du chat sont une utéroglobine (Feld1) et l’albumine sérique (CSA). Le but de
notre projet est d’identifier les épitopes T (les régions reconnues par les cellules lymphocytaires T) sur
la CSA, ainsi que sur Feld1. La construction d’allergènes recombinants modifiés, ainsi que leur expérimentation
dans des systèmes de cultures de cellules dendritiques (DC) humaines et murines, menées
en parallèle à des tests in vivo chez les souris, permettront d’étudier leur utilisation en immunothérapie.
Dans le courant de la première année, l’accent avait particulièrement été mis sur l’analyse de la réponse
immunitaire humaine à des fragments recombinants de la CSA, en fonction des déterminants
HLA (intervenant dans la réponse immune).
En 2004, des avancées majeures ont été réalisées dans l’analyse de la réponse de souris BALB/c aux
allergènes CSA et Feld1. L’utilisation de cette lignée consanguine permet de simplifier l’analyse des
résultats quant à la restriction immune des épitopes. Des modifications ont été apportées au système
de culture des DC, pour l’adapter aux souris. Les cellules dendritiques myéloïdes matures obtenues ont
été utilisées in vitro pour présenter les déterminants antigéniques à des lymphocytes T de souris
naïves ou sensibilisées. L’effet de cellules T régulatrices CD4 + CD25 + sur la prolifération de cellules
répondantes CD4 + CD25 - a été étudié.
Afin de situer les épitopes T et les épitopes B (les régions reconnues par les anticorps), 12 fragments
recombinants recouvrant l’albumine sérique et 17 peptides synthétiques recouvrant l’entièreté des 2
chaînes de l’hétérodimère Feld1 et ont été utilisés. La réponse lymphocytaire primaire contre la CSA (à
80% identique à l’albumine de souris) est principalement induite par les fragments IIr, Vr, VIIr, IXr, Xr,
XIIr. Les lymphocytes de souris sensibilisées ont donné en plus une réponse faible envers d’autres fragments.
Les domaines reconnus par les anticorps diffèrent très sensiblement des régions reconnues par
les lymphocytes T. En ce qui concerne l’allergène Feld1, la souris BALB/c reconnaît principalement le
peptide F1.4. Ceci est observé aussi bien pour les lymphocytes naïfs que pour les lymphocytes sensibilisés.
Dans le cadre de l’étude des mécanismes tolérogènes, les lymphocytes régulateurs naturels
CD4 + CD25 + étaient capables d’inhiber complètement la réponse de lymphocytes CD4 + CD25 - envers
différents épitopes T de la CSA et de Feld1. Ces résultats ont été obtenus pour des cellules régulatrices
provenant de souris naïves ou sensibilisées, en réponse immunitaire primaire comme secondaire.
L’inhibition était dose dépendante et était complète pour des ratios d’une cellule régulatrice pour trois
cellules répondantes.
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Biosan