P10607119-8 A2 - Questel

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tornar as extremidades abruptas, e cortado com Sal l para isolar um fragmento
de vetor no qual o fragmento de inserto foi ligado, resultando no pPJV7496.
(b) pPJV7530
pPJV7389 foi amplificado pela PCR com iniciadores JF393
5 (SEQ ID NO: 31) e JF406 (SEQ ID NO: 32) e cortado com Bg12 e BamHl
para isolar um fragmento de inserto contendo o RIA destituído de um sítio
Nhel interno. pPJV7496 foi cortado com BamHl para preparar um fragmento
de vetor no qual o fragmento de inserto foi ligado, resultando no pPJV7530.
(c) pPJV7549
10 pPJV7468 foi cortado com BamHl e EcoR5 para isolar um
fragmento de inserto contendo M2 e parte do HBV 3' ENH. pPJV7530 foi
cortado com BamHl e EcoR5 para preparar um fragmento de vetor no qual o
fragmento de inserto foi ligado, resultando no pPJV7549.
(d) pPJV7563
15 Os iniciadores JF256 (SEQ ID NO: 33) e JF257 (SEQ ID NO:
34) foram recozidos para preparar um fragmento de inserto consistindo de um
sítio de clonagem múltiplo. pPJV7549 foi cortado por Nhel e Bg12 para
preparar um fragmento de vetor no qual o fragmento de inserto foi ligado,
resultando no pPJV7563. Um mapa plasmídico de pPJV7563 é fornecido na
20 Figura 12. A composição base para o plasmídeo pPJV7563 é fornecida na
Figura 13. Os componentes e a sua posição no plasmídeo pPJV7563 são como
segue:
1-44 Seqüências de Transposon 903
45-860 Seqüência codificadora da resistência à canamicina do
25 Transposon 903
861-896 Seqüências do Transposon 903
897-902 sítio Sall
903-1587 Promotor CMV
1588-1718 seqüência líder não traduzida do gene imediato inicial de CMV