P10607119-8 A2 - Questel

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2544 da SEQ ID No. 14. Os fragmentos funcionais ou variantes de qualquer
uma destas seqüências podem ser utilizados.
No geral, o realçador na construção compreende seqüências
encontradas em (i) que ligam os componentes de transcrição ou proteínas
5 reguladoras, por exemplo fatores de transcrição, ou homólogos destas
seqüências que ligam os mesmos componentes ou proteínas. Preferivelmente
estas seqüências estão presentes no realçadores na mesma ordem e/ou
substancialmente o mesmo espaçamento relativo como em (i).
No geral um realçador funcional é um que realça ou aumenta a
10 expressão de um polinucleotídeo, por exemplo, uma seqüência codificadora,
que é operavelmente ligada à seqüência realçadora. Tipicamente uma variante
homóloga funcional (ii) ou fragmento (iii) tem substancialmente a mesma
atividade (por exemplo, realce de expressão) como e/ou complementa a
atividade do realçador natural (i).
15 A atividade realçadora pode ser ensaiada usando um ensaio de
aprisionamento de realçador. Os protocolos são conhecidos na técnica. Uma
variante homóloga funcional (ii) ou fragmento (iii) preferivelmente fornece
pelo menos 50% da atividade realçadora mostrada pelo realçador natural em
tal ensaio. Tipicamente a atividade é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90, 100%
20 ou mais da atividade do realçador natural. No geral, uma variante funcional
(ii) ou fragmento (iii) é capaz de complementar a atividade do realçador
natural (i) no ensaio. Qualquer um dos aumentos ou diminuições aqui
aludidos, por exemplo, podem ser observados.
25 compreende:
Em um exemplo preferido, a seqüência realçadora
(i) a seqüência de nucleotídeo da SEQ ID No: 8, SEQ ID No:
9, nucleotídeos de 3699 a 4231 da SEQ ID No. 54, nucleotídeos de 3831 a
4363 da SEQ ID No: 61 e/ou de 4507 a 5038 da SEQ ID No: 62.
(ii) uma variante funcional de (i) que tenha pelo menos 80% de