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30 Material und Methoden Abbildung 1: Entnahmelokalisationen der Lungengewebsproben (Schema der Rinderlunge, Dorsalansicht, modifiziert nach NICKEL et al. 1999) 3.4 Histochemische Färbemethoden 3.4.1 Übersichtsfärbung mit Hämatoxylin und Eosin Jeweils ein Schnitt jeder untersuchten Lokalisation wurde in einem automatisierten Färbecenter (Leica ST 4040, Leica Mikrosystems Nussloch GmbH, Nussloch) nach einem standardisierten Laborprotokoll mit Hämatoxylin und Eosin (HE) gefärbt. Diese Schnitte dienten zur Auswertung und Beschreibung der histologischen Veränderungen und zur Orientierung der Untersuchung mittels in situ-Hybridisierung und Immunhistochemie.
Material und Methoden 31 1. Entparaffinieren der Schnitte in absteigender Alkoholreihe (dreimal 5 Min. in Roti®-Histol, 5 Min. in Isopropanol, 2 bis 3 Min. in 96%igem Ethanol, 2 bis 3 Min. in 70%igem Ethanol, anschließend in Aqua dest.; 2. 15 Min. Hämalaun nach Mayer (Fa. Roth GmbH, Karlsruhe); 3. 10 Min. Bläuen in Leitungswasser; 4. 1 Min in Eosin 1%ig (Zugabe von 1 Tropfen Eisessig pro Küvette); 5. Spülen in Aqua dest.; 6. Entwässern der Schnitte in aufsteigender Alkoholreihe (2 bis 3 Min. in 70%igem Ethanol, 2 bis 3 Min. in 96%igem Ethanol, 5 Min. in Isopropanol, dreimal 5 Min. in Roti®-Histol); 7. Eindecken mit Corbit-Balsam (Fa. Hecht, Kiel). 3.4.2 Azanfärbung nach Heidenhain Zur Darstellung von kollagenem und retikulärem Bindegewebe wurden einzelne Schnitte mittels Azanfärbung nach Heidenhain gefärbt. Hierbei färbt sich extrazelluläres Kollagen intensiv blau. 1. Entparaffinieren der Schnitte in absteigender Alkoholreihe (dreimal 5 Min. in Roti®-Histol, 5 Min. in Isopropanol, 2 bis 3 Min. in 96%igem Ethanol, 2 bis 3 Min. in 70%igem Ethanol, anschließend in Aqua dest.; 2. 30 Min. Azokarmin bei 60°C im Brutschrank (Lösung gut vorwärmen); 3. Spülen in Aqua dest.; 4. 3 Min. in alkalischer 0,1%iger Anilinlösung; 5. 1 Min. in essigsaurem 15%igem Alkohol; 6. bis zu 20 Min. in 5%iger Phosphorwolframsäure (Kontrolle nach 10 Min.); 7. kurz Spülen in Aqua dest.; 8. 20 Min. in Anilinblau-Orange-Essigsäure-Gebrauchslösung; 9. kurz Spülen in Aqua dest.; 10. kurz in 96%igem Alkohol; 11. 2 Min. in Propanol; 12. 5 Min. in Essigsäurebutylester (EBE); 13. Eindecken mit Corbit-Balsam (Fa. Hecht, Kiel).
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Anhang 109 Tabelle 9: Ergebnisse de
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Anhang 119 Heraeus Sepatech GmbH, O
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Zu guter letzt bedanke ich mich bei
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