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Konfokale Einzelmolekülmikroskopie
3.1.4
Konfokale
Mikroskopie
Das kürzerwellige Anregungslicht wird an dem
farbteilenden Spiegel reflektiert. In
unserem Beispiel wurde es
außerdem
derart fokussiert,
das in der
Objektebene ein
weites Feld beleuchtet wird (Weitfeldmikroskopie). Das längerwellige Fluoreszenz-
fokussiert. Von der Probe rückgestreutes Anregungsl
licht (keine Änderung der
licht kann den farbteilenden Spiegel passieren
und wird
in der Zwischenbildebene
Wellenlänge) wird
von dem farbteilenden Spiegel abgetrennt.
Mit dem
konfokalen Prinzip
kann im Vergleich zur konventionellenn Mikroskopie das
axiale Auflösungsverhalten
wesentlich verbessert werden, zudem erhöht sich auch
das laterale Auflösungsvermögen (in der Objektebene).
Anders
als bei dem Aufbau in Abbildung 7 wird hier das Anregungslicht auf einen
Punkt in der Probe fokussiert. Damit konzentriert
sich die Anregungswahr-
scheinlichkeit in dem kleinen Bereich der Strahltaille: nur hier ist die Anregungs-
(pro
intensität hoch genug, um eine detektierbare Anzahl von Absorptionsprozessen Zeiteinheit) zu ermöglichen.
Abbildung 8 : Anregungsstrahlengang in einem
Fluoreszenz-Mikroskop
Zusätzlich
wird in dem
Detektionsstrahlengang
eine Lochblende
in der
Zwischenbildebene eingefügt. Befindet sich ein Objekt (Molekül) genau in dem
Fokus
in der Objektebene, wird dessen Abbildung die Lochblende in der Zwischenbildebene
passieren können. Objekte an anderen Positionen werden von der Lochblende
geblockt.
Johannes Gutenberg - Universität
Institut für Physikalische Chemie
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Grundmodul
Physikalische Chemie