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Konfokale Einzelmolekülmikroskopie
Abbildung 18 : Controller für die Z-Achse des Piezoscanners (Fokuseinstellung
desObjektivs)
Die Einstellung des Fokus wird über die Reflexion an der Glas-Luft-Grenzfläche des
Probengläschen durchgeführt. Dazu muss der motorisierte Spiegel in den
Strahlengang eingedreht werden. Dies wird durch die Handsteuerung (Abbildung 3)
durchgeführt. Auf Tastendruck (‚ON’) dreht der Spiegel und gleichzeitig wird der
Shutter des Anregungsstrahls geöffnet. Nun fällt das an der Grenzfläche reflektierte
Licht auf eine CCD-Kamera (siehe Abbildung 1), die an den Hauptcomputer
angeschlossen ist. Mit der Software ’CCD-Kamera’ wird das von der Kamera
aufgenommene Bild auf dem Monitor angezeigt.
Nun wird der Fokus so eingestellt, dass sich ein möglichst kleiner und heller Punkt
ergibt. Der Brennpunkt des Objektivs liegt nun genau bei der Glas/Luft-Grenzfläche.
Nun den Spiegel über die Handsteuerung wieder aus den Strahlengang entfernen
(‚OFF’).
Zusammenfassung:
(1) Prüfen, dass keine Messung läuft (APD ausgeschaltet!)
(2) Deckel des Probenraum öffnen
(3) Magnetische Folie entfernen
(4) Objektdeckgläschen vorsichtig mit Pinzette austauschen
(5) Mit Folie befestigen
(6) Deckel des Probenraums einsetzen
(7) Spiegel für die Fokussierung eindrehen
(8) CCD-Software aktivieren
(9) Fokussieren
(10) Spiegel wieder rausdrehen.
Johannes Gutenberg - Universität
Institut für Physikalische Chemie
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Grundmodul
Physikalische Chemie