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Konfokale Einzelmolekülmikroskopie
3.2.2 Scanner
Durch das konfokale Prinzip bedingt, wird immer nur ein Punkt der Probe in der
Objektebene beleuchtet bzw. auch detektiert. Um eine Abbildung der Probe zu
erhalten, muss die Probe vor dem Objektiv abgerastert werden. Dazu befindet sich
die Probe auf einem Verschiebetisch, der über Piezoaktuatoren in alle drei
Raumrichtungen verschoben werden kann. Der im Praktikum verwendet Scanner hat
eine Auflösung von ca. 20-50 nm. Die Steuerung erfolgt über einen Computer, der
auch die detektierten Intensitäten registriert und auswertet.
3.2.3 Detektionsstrahlengang
Von der Probe emittierte Photonen werden über das Objektiv wieder eingesammelt
und können zu ~93% den teildurchlässigen Spiegel passieren. Nach einem Spiegel
wird mit einem hochwertigen Langpassfilter das längerwellige Fluoreszenzlicht von
dem unveränderten Streulicht getrennt. Ein polarisationsabhängiger Strahlteilerwürfel
lenkt die Photonen polarisationsabhängig auf den Detektor D1 oder D2. Anstelle der
in Abbildung 8 gezeigten Lochblende wird die räumlich begrenzte, photoempfindliche
Detektionsfläche der Photodioden verwendet. Dadurch können einige optische
Elemente vermieden werden, die immer einen bestimmten Verlust an Photonen
durch Reflexion bedeuten würden. Die Detektoren sind empfindlich genug, um
einzelne Photonen detektieren zu können. Ein Computer zählt die ankommenden
Photonen. Aus dem Intensitätsverhältnis von D1 zu D2 kann die Polarisation der
emittierten Photonen ermittelt werden.
Johannes Gutenberg - Universität
Institut für Physikalische Chemie
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Grundmodul
Physikalische Chemie