Skript - Staff.uni-mainz.de

Konfokale Einzelmolekülmikroskopie
3.2 Experimenteller Aufbau des Fluoreszenzmikroskopes
(Praktikum)
Nach dem in den vorhergehenden Abschnitten der prinzipielle Aufbau eines
konfokalen Fluorezenzmikroskops gezeigt wurde, wird hier der aktuelle, im Praktikum
verwendete Aufbau beschrieben.
3.2.1 Anregungsstrahlengang
Zur Zeit (Stand Oktober 2011) wird für Anregung ein Diodenlaser mit einer mittleren
Wellenlänge von 638nm verwendet
Generell werden die Lichtquellen in eine Glasfaser eingekoppelt. Zusätzlich sind
noch folgende optische Elemente in dem Anregungsstrahlengang eingebaut:
- kontinuierlichen Abschwächer: hier wird die Anregungsintensität eingestellt
- Laserlinienfilter: unerwünschte Laserlinien werden abgeblockt. Nur die
gewünschten Laserlinien können den Filter passieren (=Bandpassfilter)
- Polarisationsfilter (optional): die Anregung erfolgt mit linear polarisiertem
Licht
- Shutter / Verschluss : die Probe wird nur während einer Messung angeregt
Über eine Linse wird das Anregungslicht in eine Glasfaser eingekoppelt. Prinzipiell ist
die Faser nicht notwendig, sie bietet aber deutliche Vorteile:
- die Anregungslichtquellen können ausgetauscht werden, ohne dass der
Anregungsstrahlengang im Mikroskop verändert werden muss
- die Anregungslaser können räumlich vom Mikroskop getrennt werden
- bei geeigneten Fasern erhält man an der Austrittsöffnung eine ideale
punktförmige Lichtquelle
Über einen teildurchlässigen Spiegel wird das Anregungslicht in das Objektiv gelenkt.
Die punktförmige Anregungslichtquelle wird also in der Objektebene wieder als Punkt
abgebildet.
Johannes Gutenberg - Universität
Institut für Physikalische Chemie
Seite 16
Grundmodul
Physikalische Chemie