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Konfokale Einzelmolekülmikroskopie
0 Inhalt
0 Inhalt .................................................................................................................... 3
1 Die Fluoreszenz einzelner Moleküle – Vergleich zu konventionellen
Ensemblemessungen ................................................................................................. 5
1.1 Homogene und inhomogene Linienform ...................................................... 5
1.2 Zeitabhängige Fluoreszenz .......................................................................... 6
2 Experimentelle Voraussetzungen für Fluoreszenzuntersuchungen an einzelnen
Molekülen ................................................................................................................... 7
2.1 Anzahl der Moleküle im Detektionsvolumen ................................................. 7
2.2 Fluoreszenzmessung an einzelnen Farbstoffmolekülen ............................... 8
3 Konfokale Fluoreszenzmikroskopie ................................................................... 10
3.1 Das Prinzip der konfokalen Mikroskopie .................................................... 10
3.1.1 Auflösungsvermögen .............................................................................. 10
3.1.2 Vergrößerung .......................................................................................... 12
3.1.3 Fluoreszenzmikrokopie ........................................................................... 13
3.1.4 Konfokale Mikroskopie ............................................................................ 14
3.2 Experimenteller Aufbau des Fluoreszenzmikroskopes (Praktikum) ............ 16
3.2.1 Anregungsstrahlengang .......................................................................... 16
3.2.2 Scanner .................................................................................................. 18
3.2.3 Detektionsstrahlengang .......................................................................... 18
4 Bedienungsanleitung.......................................................................................... 19
4.1 Wichtig ! ..................................................................................................... 19
4.2 Übersicht der Komponenten und Funktionen ............................................. 20
4.3 Mikroskopsteuerung ................................................................................... 22
4.3.1 Hardware ................................................................................................ 22
4.3.2 Softwaresteuerung des Mikroskops ........................................................ 23
4.4 Einzelnen Operationen ............................................................................... 24
4.4.1 Probenwechsel ....................................................................................... 24
4.4.2 Aufnahme eines Fluoreszenzbilds .......................................................... 26
4.4.3 Aufnahme von Fluoreszenzzeitspuren .................................................... 27
4.5 Datenauswertung ....................................................................................... 28
4.5.1 Analyse der Fluoreszenzbilder ................................................................ 28
4.5.2 Analyse der Zeitspuren ........................................................................... 29
5 Aufgabenstellung ............................................................................................... 32
Johannes Gutenberg - Universität
Institut für Physikalische Chemie
Seite 3
Grundmodul
Physikalische Chemie