pep-2 - Lehrstuhl für Ernährungsphysiologie - TUM
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3 Ergebnisse<br />
3.1 Identifizierung des <strong>pep</strong>-2(lg601) Knockouts in den Wurm-<br />
stämmen <strong>pep</strong>-2, <strong>pep</strong>-2;daf-2 und <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16<br />
Da <strong>für</strong> den C. elegans-Stamm <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16 ein schnelleres Wachstum beobachtet<br />
werden konnte, welches annähernd dem Wachstum des Wildtypstammes N2 entsprach,<br />
wurde <strong>für</strong> alle Wurmstämme, die in späteren Versuchen verwendeten werden sollten, eine<br />
Wurmlyse zur Gewinnung genomischer DNA und anschließend eine PCR <strong>für</strong> jedes<br />
Primerpaar durchgeführt. Die Primerpaare waren so gewählt, dass sie spezifisch den<br />
Knockout des <strong>pep</strong>-2(lg601) Allels anzeigen (siehe Abb. 14, Punkt 2.1.5.2), wobei das<br />
Primerpaar 2 <strong>pep</strong>-2_ko_for und <strong>pep</strong>-2_ko_rev die Homozygotie des Knockouts nachweist<br />
(unveröffentlichte Daten).<br />
3 kb<br />
2 kb<br />
0,5 kb<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9<br />
Abb. 18: DNA-Agarosegel (1 %ig) zur Überprüfung des <strong>pep</strong>-2(lg601) Knockouts in den<br />
C. elegans-Stämmen <strong>pep</strong>-2, <strong>pep</strong>-2;daf-2 und <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16. Als Kontrolle wurden N2<br />
Würmer mitgeführt. (1) Gene Ruler TM DNA Ladder Mix (2) N2 (3) N2 (4) <strong>pep</strong>-2 (5) <strong>pep</strong>-2<br />
(6) <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16 (7) <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16 (8) <strong>pep</strong>-2;daf-2 (9) <strong>pep</strong>-2;daf-2.<br />
In Abb. 14 ist dargestellt wie das Kontrollgel <strong>für</strong> einen bestehenden <strong>pep</strong>-2 Knockout <strong>für</strong><br />
beide Primerpaare aussehen soll. Aus Abb. 18 wird jedoch deutlich, dass der Wurmstamm<br />
<strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16 diesen Knockout nicht besitzt, da er Bandenmuster aufweist, die dem<br />
des Wildtyps entsprechen. Somit konnte mit den Wurmstämmen N2, <strong>pep</strong>-2, und <strong>pep</strong>-2;daf-<br />
2 weitergearbeitet werden. Jedoch musste <strong>für</strong> den Wurmstamm <strong>pep</strong>-2;daf-2;daf-16 im<br />
48<br />
2. PCR mit Primerpaar 2
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