2. Allgemeiner Teil - Online-Publikationen

Allgemeiner Teil
(typischerweise 1,5-10µm) mit Porendurchmessern zwischen 6 und 400 nm verwendet
werden (144).
Unterschieden wird zwischen der Normalphasen-HPLC (engl. Normal Phase, NP) und der
Umkehrphasen-HPLC (engl. Reversed Phase, RP). Bei der Umkehrphasen-HPLC werden
eine unpolare stationäre Phase aus mit organischen Resten derivatisiertem Kieselgel (u.a.
Dimethyl-, Butyl-, Octyl- (RP-8) oder Octadecyl- (RP-18)) und eine polare mobile Phase
(meist Acetonitril, Methanol und Wasser) angewandt. Die Normalphasen-HPLC zeichnet
sich hingegen durch eine polare stationäre Phase (Kieselgel, Amino- oder Diolphasen)
sowie eine vorwiegend unpolare mobile Phase (z.B. Chloroform, Hexan) aus.
Obwohl die meisten Trennungen mit Hilfe der mittlerweile in der Bioanalytik eine zentrale
Rolle spielende Umkehrphasen-HPLC bewältigt werden, gewinnt die Normalphasen-HPLC
insbesondere bei der Lipidanalytik wieder an Bedeutung. Mit der Normalphasen-HPLC
können nämlich mehrere Lipidklassen nebeneinander im selben Lauf getrennt werden (24).
Die Entwicklung von neuen HPLC-Methoden basiert in erster Linie auf der Wahl der
geeigneten stationären Phase sowie auf der Zusammensetzung der mobilen Phase. Die
Elutionskraft stellt den wichtigsten Faktor dar, der der Optimierung der mobilen Phase zu
Grunde liegt. Die Lösungsmittel können in sog. eluotropen Reihen angeordnet werden, die
für die unterschiedlichen Packungsmaterialien verschieden sind und in erster Linie von der
Polarität abhängen (42, 78). Für Kieselgel nimmt die Elutionskraft in der Reihenfolge
Octan < Hexan < Chloroform < Diethylether < Propanol < Ethanol < Methanol <
Essigsäure < Wasser zu.
Bei analytischen Trennungen wird nach Möglichkeit versucht, dass die mobile Phase über
die gesamte Trennzeit eine konstante Zusammensetzung aufweist, wobei hier von einer
isokratischen Elution gesprochen wird. Stellen die Analyten hingegen ein komplexes
Gemisch dar, dann ist in vielen Fällen eine Gradientenelution unerlässlich, bei der die
Zusammensetzung der mobilen Phase sich in der Weise ändert, dass die Elutionskraft im
Laufe der Trennzeit zunimmt. Da die meisten Lipide der konventionellen UV/Vis-
Detektion nicht zugänglich sind, kommen als Alternativen ein ELS-Detektor oder die
LC/MS in Frage.
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