1 Einleitung - Universität zu Lübeck

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falsch niedrige Werte für LDL-C berechnen kann (Abschnitte Ergebnisse Kap. 3.2.6,
S. 37).
Zur Bestimmung des HDL-Cholesterins erfolgt zuerst eine Absorption von synthetischen
Polyanionen an der Oberfläche von Lipoproteinen. Bis auf das HDL werden LDL, VLDL
und Chylomikronen in eine detergenzresistente Form umgewandelt. Es kommt durch die
kombinierte Wirkung von Polyanionen und Detergenz zur Lösung des Cholesterins von
HDL nicht aber von LDL, VLDL und Chylomikronen. Das gelöste Cholesterin kann nun mit
der Cholesterinesterase und Cholesterinoxidase in oxidiertes Cholesterin und H2O2
umgewandelt werden. Schließlich ergibt die Reaktion mit einem Reagenz einen roten
Farbstoff, dessen Intensität proportional zur HDL-Cholesterinkonzentration ist (Firma
Roche Diagnostics, Deutschland).
Die Bestimmung von Sphingomyelin und Phospholipid-Transferprotein erfolgte im SUNY
Downstate Medical Center Brooklyn der State University of New York, (Direktor: Prof.
Xian-Cheng Jiang aus dem Institut für Anatomie und Zellbiologie der State University of
New York). Die PLTP-Aktivität wurde mit einem kommerziell verfügbaren Kit bestimmt
(Cardiovascular Target, Inc, NY, USA), die Analyse erfolgte für den Untersucher
verblindet bzgl. Patienten und Kontrollen. Der Kit besteht im Wesentlichen aus Donor- und
Akzeptor-Partikeln. Die Zugabe von 3µl Plasma resultiert in einem PLTP-vermittelten
Transfer von fluoreszierenden Phospholipiden. Dieser Transfer wurde als Anstieg der
Fluoreszenz-Intensität gemessen. Der Interassay-Koeffizient der PLTP-Aktivitäts-Variation
beträgt 3,3±0,5%. Der lineare Bereich der PLTP-Aktivität erstreckt sich von 1 bis 7µl
Plasma. Die Testergebnisse wurden durch dreimaliges Einfrieren und erneutes Auftauen
nicht beeinflusst. Zur Validierung des Tests wurde er mit einer anderen, klassischen
Methode der PLTP-Aktivitätsbestimmung verglichen (37). Die Methoden zeigten einen
Korrelationkoeffizienten von r= 0,9 (n= 30, p= 0,01).
Die enzymatische Meßmethode von Sphm Spiegeln im Plasma erfolgte nach einer
bekannten Meßmethode (66) in insgesamt vier Schritten. Zunächst wird Sphm durch
bakterielle Sphingomyelinase zu Phosphorylcholin und N-Acetylsphingosin hydrolisiert.
Anschließend wird durch die Zugabe von alkalischer Phosphatase Phosphorylcholin in
Cholin umgewandelt. Das dadurch gewonnene Cholin wird durch Cholinoxidase zu
Hydrogenperoxid katalysiert. Als letzter Schritt wird Hydrogenperoxid mit Phenol und 4-
Aminoantipyrin zusammen gegeben. Unter der katalytischen Wirkung von Peroxidase
wird ein rotes Chinonpigment mit einer optimalen Lichtabsorbtion bei 505 nm erzeugt. Der
Messbereich in diesem Assay erstreckt sich von 10 bis 120 µg/dl. Der
Variationskoeffizient zwischen den Assays lag bei 2,8± 0,3%.