1+2/2006 - SpoleÄnost pro pojivové tkánÄ›
1+2/2006 - SpoleÄnost pro pojivové tkánÄ›
1+2/2006 - SpoleÄnost pro pojivové tkánÄ›
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
a přídatné čočky osvětlujícího systému je<br />
třeba odstranit, abychom dosáhli maximální<br />
světelné intzenzity. Numerická apertura<br />
kondenzoru by měla být tak vysoká, jak jen<br />
je možné. Proto je nutné používat immersní<br />
objektivy a kondenzory k dosažení maximálních<br />
detailů a kontrastu. Doporučuje se<br />
použít nefluoreskujícího oleje.<br />
Osvětlení může jít shora nebo je průchozí.<br />
První způsob (epifluorescence)<br />
vykazuje větší intenzitu, kdy obraz je brilantnější<br />
(s větším kontrastem při malé<br />
ztrátě světelné energie). Další možnost je<br />
speciální úprava kondenzoru umožňující<br />
zvýšení fluorescence.<br />
3.1.9 Mikrofotografie<br />
Vzhledem k tomu, že pracujeme<br />
s nízkou intenzitou světla, je třeba dlouhé<br />
expozice a fotoaparát nesmí vibrovat.<br />
Mikroskop musí být umístěn na zvláštním<br />
stole, kde se nesmí během expozice nic<br />
jiného dělat. Filmový materiál je třeba pečlivě<br />
vybírat, vhodné jsou vysoce citlivé<br />
černobílé filmy. Jemnozrnější, ale méně citlivé<br />
filmy vyžadují <strong>pro</strong>dlouženou expoziční<br />
dobu – potom vznikají artefakty způsobené<br />
vibrací a posunem objektu. Při použití speciálního<br />
kondenzoru <strong>pro</strong> osvětlení nebo<br />
epifluorescenční osvětlení může být doba<br />
expozice <strong>pro</strong>dloužena na 5 až 10 sekund,<br />
s nejcitlivějšími filmy při největších zvětšeních.<br />
Jemnozrnné filmy vyžadují dlouhou<br />
expozici a neumožňují zhotovit více než 1–<br />
2 fotografie z téže buňky. Pak dojde k ukončení<br />
fluorescence, k tzv. úniku. Přesto se<br />
však jemnozrnné filmy používají k dosažení<br />
nejjemnějších detailů. Kom<strong>pro</strong>misním<br />
řešením je film, vyžadující 50–60 sekund<br />
při maximálním osvětlení. Pokud používáme<br />
mikroskop s automatickou kamerou,<br />
neměl by se používat automat regulující<br />
expoziční dobu, <strong>pro</strong>tože třetina světla <strong>pro</strong>chází<br />
fotometrem a dochází ke ztrátě intenzity<br />
tak cenného světla.<br />
Analýza preparátů se <strong>pro</strong>vádí za rychlého<br />
<strong>pro</strong>hlížení pod mikroskopem, <strong>pro</strong>tože<br />
je nelze dlouho uchovávat a preparáty<br />
„unikají“ při světelné expozici. Detailnější<br />
analýza chromozómů je možná pouze na<br />
fotografiích zvyšujících rozdíly v intenzitě<br />
fluorescence. Proto je nutné fotografovat<br />
dostaečné množství metafází a je to efektivnější,<br />
než je přímo dlouho <strong>pro</strong>hlížet.<br />
Jedině Y chromozóm je možno v interfázickém<br />
jádře hodnotit vizuálně přímo<br />
pod mikroskopem. Protože preparáty nedávají<br />
jednotně dobré výsledky, a kterákoliv<br />
jedna metafáze není dost informativní, je<br />
třeba fotografovat dostatečný počet buněk.<br />
Určitou vyjímkou jsou anomálie Y chromozómu,<br />
které mohou být rozpoznány z relativně<br />
malého počtu buněk. Strukturní anomálie<br />
Y se <strong>pro</strong>jeví různou velikostí skvrny<br />
Y chromatinu. Více Y chromozómů tvoří<br />
odpovídající počet skvrn v interfázickém<br />
jádře buněk.<br />
3.1.10 Fluorescenční barviva<br />
a jejich použití<br />
V zásadě se používají dva základní typy<br />
barviv: akridinová oranž a deriváty quinacrinu.<br />
Proflaviny a akridiny mají schopnost<br />
vmezeření do DNK. Akridinová oranž,<br />
což je 3,6 bis – dimethyl – amino – acridinium<br />
- chlorid, je méně používaným typem<br />
barviva, quinacrinová deriváty mustard<br />
a dihydrichlorid (Atebrin) jsou používány<br />
častěji.<br />
Charakteristika akridinové oranže<br />
Lze jí <strong>pro</strong>vádět diferenciální barvení<br />
dvouřetězcové a jedořetězcové DNK<br />
46<br />
LOCOMOTOR SYSTEM vol. 13, <strong>2006</strong>, No. <strong>1+2</strong>
Change language