liiiMIIIfl~UDliiiMIII~U - Biblioteca de la Universidad Complutense ...

Canítulo 1 Introducción
corazón (en términos de 1C 50 para el malonil-CoA
y Km para la camitina) con respecto a las observadas
en hígado y en músculo esquelético (McGarry
eta!, 1983).
Correlación estructurafunción
Aunque todavía no se ha determinado la
estructura de ninguna de las CPT de forma inequívoca,
sí existen datos aportados por estudios de
expresión en levaduras, por comparación de secuencias
o por utilización de anticuerpos específicos
frente a distintos dominios de estas proteínas
que permiten conocer algunos datos acerca de la
topología de estas enzimas.
Tonologla en la membrana
La CPT-1l se encuentra débilmente asociada
a la cara interna de la membrana mitocondrial
interna y puede ser solubilizada fácilmente en su
forma activa (Woeltje el aL, 1987). En concordancia
con esta observación, la CPT-1l no presenta
ninguna secuencia de aminoácidos indicativa de la
presencia de fragmentos transmembranares
(Woeltje el a!, 1990b).
La forma de asociación a la membrana externa
mitocondrial de la CPT-l parece considerablemente
diferente. El hecho de que la enzima no
pueda solubilizarse en su forma activa mediante la
utilización de detergentes suaves ya es indicativo
-ooc
citoplasma
espacio intermenibrana
de una fuerte asociación a la membrana. La secuencia
deducida tanto para la isoforma L como
para la M de la CPT-1 dé rata contiene dos dominios
hidrofóbicos entre los aminoácidos 53 y 75
(HI) y 103 y 122 (H2). Aunque se ha cuestionado
que Hl pudiera ser un fragmento transmembranar
debido a la presencia de dos prolinas en las posiciones
56 y 59 de la secuencia de aminoácidos de
la proteína (aminoácidos poco habituales en este
tipo de dominios), diferentes datos parecen indicar
que realmente adopta esta estructura. La presencia
de 5 aminoácidos con carga positiva altamente
conservados en el extremo amino terminal de la
secuencia HI, junto a la conservación de distribuciones
de carga de un affiinoácido positivo y uno
negativo en el extremo carboxilo terminal de dicho
dominio, son características de proteínas de membrana
que presentan el amino terminal hacia la cara
citoplásmica (Kolodziej y Zammit, 1993). Así, se
ha propuesto que la CPT-1 tendría dos fragmentos
transmembranares (Hl y H2) de tal forma que
tanto el extremo amino como el carboxilo terminal
se situarían hacia la cara citoplásmica de la membrana
mitocondrial externa y que el corto bucle de
27 aminoácidos que une Hl y H2, estaría situado
hacia el espacio intermembrana (Fraser el a!,
1997) (Fig 5). Dc acuerdo con esta hipótesis, una
serie de estudios realizados con malonil-CoA y
octanoil-CoA asociados a agarosa (para imposibilitar
que pudiesen atravesar la membrana mitocon-
Figura 5 Topología de la CPT-I en la memebrana mitocondrial externa. En la figura se exponen las principales
características de la topología de la CPT-l: (i) La proteína tiene dos fragmentos transmembranares (Hl y H2); tanto el
extremo N como C terminal de la proteína están expuestos en la cara citosólica de la membrana mitocondrial externa.
Las letras C, A’ yL, indican la localización de los fragmentos frente a los cuales se han desarrollado anticuerpos especíticos.
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