HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

Testprotokolle
Testverfahren
Kurz-
Protokoll
Ultra-Kurz-
Protokoll
Lymphknoten und
Milzgewebe kleine
Wiederkäuer
Schritt
Aktivität
Alle Schritte bei
18–26°C
32–37°C 1 :
Nur Inkubationen
(Schritte 3,5,8,10)
18–26°C: Alle
anderen Schritte
einschließlich der
Waschvorgänge
Alle Schritte bei 18–26°C
1
2
3
4
5
6
Probenzugabe in
unbeschichtete
Mikrotiterplatte zur
Probenverdünnung
Probenzugabe in
Antigenbindungsplatte
Capture-Platten-
Inkubation
Mit 1x-
Waschlösung 1
waschen
Zugabe /
Inkubation
Konditionierungspuffer
Mit 1x-
Waschlösung 2
waschen
7 Konjugatzugabe
Gehirngewebe: 120 μl Probe mit 30 μl
Arbeitslösung des Probenverdünners
Lymphknoten und Milz:
100 μl Probe mit 50
μl Arbeitslösung des
Probenverdünners
GUT MISCHEN -(Siehe Abschnitt “Verdünnung der Probe mit der
Arbeitslösung des Probenverdünners”) Abschnitt.
45–60 Min.,
langsam schütteln,
200 ±100 U/min
100 µl der verdünnten Probe auf die
Antigenbindungsplatte pipettieren;
Kontrolllösung mischen und 100 µl im Doppelansatz
auf Antigenbindungsplatte pipettieren;
Mikrotiterplatte abdecken.
20–25 Min.,
langsam schütteln,
200 ±100 U/min
Die Vertiefungen sechsmal mit ~350 µl
1x-Waschlösung 1 waschen.
2–3 Stunden (stillstehend)
100 µl Konditionierungspuffer in jede Vertiefung hinzugeben, die
Mikrotiterplatte abdecken und 10 ±1 Min. inkubieren.
Die Vertiefungen dreimal mit ~350 µl
1x-Waschlösung 2 waschen.
100 µl verdünntes Konjugat (bei Rinderhirn und Lymphknoten/Milz
von kleinen Wiederkäuern CC verwenden; bei Gehirn von kleinen
Wiederkäuern SRB-CC verwenden) und Mikrotiterplatte abdecken.
8 Konjugatinkubation 45–50 Min. 25–30 Min. 60–75 Min.
9
10
11
Mit 1x-
Waschlösung 2
waschen
Substratzugabe /
-inkubation
Zugabe
Stopplösung/
Mikrotiterplatte
lesen
Die Vertiefungen fünfmal mit ~350 µl
1x-Waschlösung 2 waschen.
100 µl Substrat in jede Vertiefung hinzugeben,
Mikrotiterplatte abdecken, 15 ±1 Min. lang inkubieren. Direkte
Sonneneinstrahlung vermeiden
(keine Klebeabdeckung verwenden).
100 µl Säurestopplösung hinzugeben, die Mikrotiterplatte kann bis
zu 30 Min. im Dunkeln aufbewahrt werden, bevor die optische Dichte
(450 nm) abgelesen wird, mit einer Referenzwellenlänge von (A REF
) 620
nm bis 650 nm.
1. Inkubation bei 32–37°C bedeutet, dass die Testplatte in den bereits auf 32–37°C vorgeheizten Inkubator eingelegt wird.
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