HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

Armazenamento dos Reagentes Preparados
Item Volume de Reconstituição Tempo de Armazenamento
N/P Controlo Negativo/Positivo 1 ml 2 horas a 18–26°C
(6 meses a -20°C)
D2 Componente 2 de diluição para placas 200 µl 1 hora a 18–26°C
(6 meses a -20°C)
Diluente de placa de trabalho NA* 8 horas a 18–26°C
HRPO: soluções anti-PrP NA* 4 horas a 18–26°C
Solução 1 de lavagem x1 NA* 1 semana a 18–26°C
Solução 2 de lavagem x1 NA* 1 semana a 18–26°C
Conservar qualquer porção não utilizada de placas num recipiente hermético, isento
de humidade e ao abrigo da luz.
Procedimento de Ensaio
Os homogeneizados das amostras são preparados conforme descrito na secção de
Amostragem e Preparação de Tecidos. É possível utilizar um processador de amostras
automatizado em vez do método manual desde o Passo 1 ou assim que os controlos e
as amostras diluídas tenham sido adicionados à placa de recolha de antigénio (Passo 3).
Importante: Cobrir cada placa de ensaio com uma cobertura de plástico rígido ou
adesiva durante todas as incubações de reagentes. Se as incubações de reagentes
forem conduzidas num gabinete de biossegurança, as placas devem ser cobertas por
folhas adesivas.
Protocolos do Ensaio
O IDEXX BSE-scrapie EIA dispõe de dois protocolos aprovados para tecido cerebral: Curto
e Ultra-curto. Os protocolos apresentam um desempenho equivalente, mas têm requisitos
de equipamentos diferentes para um menor tempo de ensaio. Os protocolos encontram-se
descritos detalhadamente na página 66.
Nota: O protocol para teste de baço e linfonodo de pequenos ruminantes é diferente
dependendo se for protocolo Curto ou Ultra-curto e está descrito na tabela de Protocolo de
Ensaio abaixo
Diluição da amostra em Diluente de Placa de Trabalho
Utilizar una folha de trabalho para indicar as posições das amostras na placa de captura de
antigénio e na placa de diluição. Reservar cavidades em duplicado para os controlos do kit.
O diluente da placa de trabalho pode adicionar-se antes ou depois da amostra. A razão é
de 30 µl de diluente da placa de trabalho para cada 120 µl de homogeneizado da amostra
(a razão para o baço e nódulos linfáticos de pequenos ruminantes é de 50 µl de diluente
para cada 100 µl de homogeneizado da amostra).
Suspender novamente os homogeneizados por inversão e pipetar cuidadosamente a
amostra, introduzindo uma ponta de pipeta de transferência de homogeneizados através
dos rebordos e extraindo a amostra a partir do tubo de ruptura de tecidos. Dispensar
cuidadosamente cada amostra na placa de diluição, evitando que se formem bolhas no
homogeneizados ou deixar qualquer resíduo de homogeneizado nas extremidades da
cavidade da placa de diluição.
Após homogeneizado estar diluido, misturar bem as amostras, tendo o cuidado de evitar a
formação de bolhas. A mistura pode ser feita numa pipeta ou num agitador de placas. Se
for utilizado um agitador, é necessário optimizar a velocidade e o tempo para garantir uma
mistura completa sem salpicar as amostras. Prosseguir com o ao ensaio durante as duas
horas seguintes.
* NA = Não aplicável
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