HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

9
10
11
Lavagem com
solução de
lavagem 2 (dil).
Adição/Incubação
de Substrato
Parar adição/Ler
placa
Lavar os poços 5 vezes Utilizando ~350 µl por poço, em cada
lavagem, com solução de lavagem 2 (dil).
Adicionar 100 µl de substrato em cada poço; tapar a placa;
incubar 15 ±1 min. ao abrigo da luz solar directa (não utilizar
cobertura adesiva).
1. A incubação a 32–37°C significa inserir a placa de ensaio num incubador pré-aquecido a 32–37°C
Revisão do formato dos testes
Prep. da amostra:
Seringa de Amostras
de tecido
Pré-homogeneizado do
tecido (pré-homogeneização)
Condições do teste:
Adicionar 100 µl de solução de paragem ácida; a placa pode
ser mantida no escuro até 30 min. antes da leitura da densidade
óptica (450 nm), utilizando um comprimento de onda de referência
de (A REF
) 620 nm a 650 nm.
Cérebro bovino
Cérebro de
pequenos
ruminantes
Nódulos linfáticos
ou tecido esplénico
pequenos
ruminantes
Sim Não Não
Não Não Sim
Concentrado de Conjugado CC SRB-CC CC
Diluente da placa de trabalho
(Proporção Diluente/
Homogeneizado)
Protocolos aprovados
Ponto de corte (cut-off)
do Teste
30 µl/120 µl 30 µl/120 µl 50 µl/100 µl
Curto e
Ultra-curto
Curto e
Ultra-curto
baço & nódulos
linfáticos de
pequenos
ruminantes
NCx + 0,120 NCx + 0,180 NCx + 0,180
tratamento térmico opcional Sim Não Não
Interpretação de Resultados
Para que um ensaio seja válido, a média de controlo negativo (NCx) deve funcionar com
um valor de A 450
– A REF
inferior a 0,150, e a média de controlo positivo (PCx) deve ter um
valor maior ou igual a A 450
– A REF
≥0,400.
Cálculos
Cálculo da média de controlo negativo (NCx):
NCx = A1 (A 450 – A REF ) + B1 (A 450 – A REF )
Cálculo da média de controlo positivo (PCx):
PCx = C1 (A 450 – A REF ) + D1 (A 450 – A REF )
Cálculo do valor “cutoff”:
2
2
Ponto de corte (“cutoff”) bovino = NCx + 0,120
Ponto de corte (“cutoff”) pequenos ruminantes = NCx + 0,180
NOTA: Consultar o passo 11 do procedimento de teste, em Protocolos do Ensaio, para a
definição de A REF
.
57