HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

Protocolli per l’esame
Procedura del test
Protocollo
Breve
Protocollo
Ultra-Breve
Protocollo milza/
linfonodi di piccoli
ruminanti
Passaggio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Attività
Aggiunta del
campione
alla piastra di
diluizione
Aggiunta del
campione alla
piastra di cattura
dell’antigene
Incubazione
della piastra di
cattura
Lavare con
soluzione 1 di
lavaggio 1X
Conditioner:
Aggiunta/
Incubazione
Lavare con
soluzione 2 di
lavaggio 1X
Aggiunta del
coniugato
Incubazione del
coniugato
Lavare con
soluzione 2 di
lavaggio 1X
Aggiunta/
Incubazione del
substrato
Aggiunta della
soluzione di
arresto/Lettura
della piastra
18–26°C
Tutti i passaggi
32–37°C 1 : Solo
per l’incubazione
(passaggi 3, 5, 8, 10)
18–26°C: Tutti gli altri
passaggi, inclusi i
passaggi di lavaggio
Tessuto cerebrale: 120 μl di campione con
30 μl di diluente per piastra da lavoro.
18–26°C
Tutti i passaggi
Linfonodi e milza:
100 μl di campione
con 50 μl di diluente
per piastra da lavoro.
MESCOLARE BENE: consultare il capitolo “Diluizione di un
campione in un diluente per piastra da lavoro”.
Pipettare 100 µl di campione diluito sulla piastra per l’esame;
mescolare i controlli, aggiungere 100 µl in duplicato; coprire la
piastra con un coperchio per piastre.
45–60 minuti;
agitare lentamente a
200 ±100 rpm
20–25 minuti;
agitare lentamente
a 200±100 rpm
2–3 ore fermo
Lavare i pozzetti 6 volte con ~350 µl di soluzione 1
di lavaggio 1X
Aggiungere 100 µl di tampone di condizionamento a ciascun
pozzetto; coprire la piastra; incubare per 10 ±1 minuti.
Lavare i pozzetti 3 volte con ~350 µl di soluzione 2
di lavaggio 1X.
Aggiungere 100 µl di coniugato diluito (per tessuto cerebrale
bovino e linfonodi /milza di piccoli ruminanti usare CC; per tessuto
cerebrale di piccoli ruminanti usare SRBCC) e coprire la piastra con
l’apposito coperchio.
45–50 minuti 25–30 minuti 60–75 minuti
Lavare i pozzetti 5 volte con ~350 µl di soluzione 2
di lavaggio 1X
Aggiungere 100 µl di substrato a ciascun pozzetto;
coprire la piastra; incubare per 15 ±1 minuti. Evitare l’esposizione
diretta alla luce.
(non usare coperture adesive)
Aggiungere 100 µl di soluzione di arresto acido; la piastra può
essere tenuta fino ad un massimo di 30 minuti al buio prima della
lettura della densità ottica (450 nm) con una lunghezza d’onda di
riferimento di (A REF
) 620 nm–650 nm.
1. L’incubazione a 32–37 °C viene eseguita posizionando la piastra di analisi in un incubatore preriscaldato a 32–37°C
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