HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

Resultados
A interpretação dos resultados baseia-se na absorvância da amostra. As amostras cujos
valores de A 450
– A REF
são inferiores ao valor “cutoff” são consideradas negativas pelo Kit de
Teste de Antigénio para EEB-Scrapie IDEXX HerdChek. As amostras cujos valores A 450
– A REF
são iguais ou superiores ao valor “cutoff” são classificadas como inicialmente reactivas para
PrP Sc , e o homogeneizado deve ser novamente testado em duplicado com o Kit de Teste de
Antigénio para EEB-Scrapie IDEXX HerdChek.
A repetição dos testes aos cérebros de bovinos pode ser feita a partir do homogeneizado de
tecido original, ou a partir do homogeneizado preparado usando o protocolo de tratamento
térmico opcional para bovinos, descrito a seguir. Se algum dos valores repetidos for igual ou
superior ao valor “cutoff” do teste, a amostra é considerada positiva. A amostra é considerada
negativa quando ambas as repetições do novo teste forem inferiores ao valor “cutoff” do teste.
Dentro da UE, todas as amostras inicialmente reactivas que se apresentarem negativas após o
protocolo de tratamento térmico devem ser reportadas como negativas. Nos estados membros
da União Europeia, todas as amostras e os tecidos correspondentes que tenham dado
resultados positivos no teste devem ser enviados para o LNR para confirmação.
Amostras de pequenos ruminantes devem 68 ser testadas em duplicado directamente a partir
do homogeneizado de tecido original. NÃO submeter amostras de pequenos ruminantes ao
tratamento térmico. Se algum dos valores repetidos for igual ou superior ao valor “cutoff” do
teste, a amostra é considerada positiva. A amostra é considerada negativa quando ambas as
repetições do novo teste forem inferiores ao valor “cutoff” do teste.
Protocolo de tratamento térmico opcional para homogeneizados de bovinos
inicialmente reactivos:
(O protocolo de tratamento térmico aplica-se apenas para amostras de bovinos.)
Remover 230 ± 20 µl do homogeneizados de tecido inicialmente reactivo e colocar
num frasco de fundo cónico de 1,5-2,0 ml com tampa de rosca. Colocar o frasco
num bloco de aquecimento seco pré-aquecido a 70°C±2°C. Aquecer o tubo durante
10 ±1 min e depois transferir o tubo para um suporte aberto á 18–26°C e aguardar um
mínimo 20 minutos para permitir o arrefecimento da amostra. O homogeneizado deve
ser novamente testado dentro de un periodo máximo de duas horas após o tratamento
térmico, em duplicado, no Kit de Teste de Antigénio para EEB-Scrapie IDEXX HerdChek.
Precauções
• Não exponha o substrato Tetrametilbenzideno (TMB) à luz forte ou agentes oxidantes.
Use um recipiente limpo ou descartável de plástico para eliminar o TMB.
• Deve ser tomado cuidado para evitar a contaminação dos componentes do kit.
Não use componentes que já tenham passado o prazo de validade e não misture
componentes de lotes de kits diferentes.
• Alguns componentes de kits contêm azida de sódio como conservante (ver
a descrição dos componentes do kit). Deve ser tomado cuidado para evitar a
contaminação do conjugado anti-PrP-HRPO com soluções que contenham azida.
• Armazenar todos os reagentes a 2–8°C. Colocar os reagentes à 18–26°C antes da
utilização e voltar a armazenar correctamente à temperatura de armazenamento após
a utilização (ver Armazenamento dos Reagentes Preparados).
• Usar dispositivos diferentes para distribuir cada reagente utilizado no ensaio. Evitar a
contaminação cruzada do substrato TMB com a solução de conjugado diluída. Não
voltar a colocar no frasco original, solução de TMB não utilizada.
• Não deixar as placas de micro-titulação repousarem por mais de 5 minutos entre os
passos de lavagem e a adição de reagentes.
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