HerdChek* BSE-Scrapie Antigen BOVINE SPONGIFORM ... - Defra

Amostragem de Tecidos e Preparação
A. Tecido Cerebral (Bovinos e Pequenos
Ruminantes)
1. Amostragem e testes de laboratório deve seguir
o regulamento (CE) n º 999/2001, anexo X,
capítulo C, que se refere em termos de coleta
de amostras para a última edição do Manual de
Normas para Testes de Diagnóstico e Vacinas do
Instituto Internacional de doenças e Epizootias
(OIE) afirmando: “A amostra preferida para
imunoensaio deverá ser o, ou mais próximo
possível do obex, mas não mais do que 1,5 cm
anterior ao obex”. Recolher 0,30 g (±0,05 g) de
tecido nervoso do lado esquerdo ou direito do
tronco cerebral ao nível do óbex (sempre que
possível) com instrumentos de dissecção, e
pesando a amostra em balança de precisão para
garantir a quantidade correcta. Em alternativa,
o dispositivo de colheita de amostras IDEXX pode ser utilizado para colheita de óbex
de bovinos, conforme descrito no Apêndice. O pessoal que realiza a colheita o óbex
deve ter formação sobre o método de amostragem.
A figura à direita indica a área correcta de amostragem.
Área de
amostra (óbex)
Cérebro
Medula espinhal
Figura 1. Tronco cerebral bovino.
© British Crown Copyright (Fevereiro
2005), reproduzido com a autorização
e cortesia da Agência de Laboratórios
Veterinários.
NOTA: Após a colheita de amostras, uma hemissecção completa do tronco cerebral
com uma região intacta do óbex e cerebelo (se incluído) deve continuar disponível
para testes de confirmação.
2. Colocar o tecido num tubo de ruptura de tecidos e fechar bem. Os tubos são
fornecidos com rebordos de cerâmica e tampão.
3. Quatro dispositivos de ruptura de tecidos foram validados para utilizar com o IDEXX
EEB-Scrapie EIA. Disponha os tubos no instrumento e proceda à disrupção, conforme
indicado para o instrumento aplicável. Se a trituração for insuficiente, repita um ciclo.
• Programa do instrumento FastPrep*: Triturar as amostras durante 40 segundos à
velocidade máxima (6,5 m/s). Se for necessário um segundo ciclo, o instrumento deve
arrefecer durante 5 a 10 minutos entre ciclos.
• Programa para os intrumentos Precess 48*, Precess 24* and Precellys 24*: Triture as
amostras 2 vezes por 20 a 25 segundos a 650nm, com 5 segundos de intervalo entre os
ciclos.
4. Os homogeneizados (frescos ou descongelados) podem ser conservados à 18–26°C
até 4 horas antes de iniciar o ensaio.
O número de amostras a serem preparadas numa única sessão é flexível. Os
homogeneizados podem ser conservados até 24 horas a 2–8°C ou mantidos a
≤-20°C até 6 meses. Os homogeneizados congelados devem ser descongelados e
completamente misturados por inversão antes da utilização. As amostras de tecidos
podem ser conservadas a -80°C.
B. Gânglio Linfático ou Tecido Esplénico (Pequenos Ruminantes)
1. Recolher 0,30 g (±0,05 g) de tecido do nódulo linfático ou tecido esplénico. No caso
dos nódulos linfáticos, o tecido deve ser preparado para amostra de forma a maximizar
a presença de células centro germinais. Cortar o tecido em 8–10 pequenas partes.
2. Proceder com o processamento e armazenamento da amostra, conforme descrito para
o tecido cerebral.
NOTA: Linfonodo ou tecido do baço não podem ser utilizados no contexto da amostragem
oficial e testes no âmbito do Regulamento (CE) n º 999/2001.
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