Revue internationale d'écologie méditerranéenne Mediterranean ...

microbienne est préalablement effectuée en
agitant (30 min, 120 oscillations. min -1 ) 5 g
(équivalent sec) d’échantillon frais dans
150 ml de pyrophosphate de sodium à 0,1 %
stérile. Les suspensions sont ensuite centrifugées
à 500 g pendant 6 min à 4 °C. Une aliquote
de surnageant a été diluée au 1/100 avec
une solution saline (NaCl 0,85 %) stérile.
Finalement, les 96 puits des microplaques FF
ont été inoculés avec 125 µL de la suspension
diluée. Les plaques ont été incubées à 25 °C
pendant 7 jours. Trois fois par jour durant le
temps complet de l’incubation, la DO des différents
puits a été lue à 490 nm en utilisant un
spectrophotomètre type Elisa 960. La diversité
fonctionnelle (DF) a été calculée en utilisant
l’indice de Shannon (Zac et al. 1994) :
DF = - Σ p i (ln p i ) où p i est le ratio de la DO
d’un puits sur la somme des DO positives de
tous les puits de l’échantillon.
Caractéristiques biochimiques
des horizons de l’épisolum humifère
Les composés phénoliques hydrosolubles ont
été obtenus par une extraction aqueuse à froid
et dosés par la méthode décrite par Gallet &
Lebreton (1995). Une aliquote de 200 mg
d’échantillon préalablement lyophilisée,
broyée et tamisée à 0,5 mm, a été mélangée à
5 ml d’eau distillée, puis agitée pendant
1 heure. Après l’agitation, les suspensions ont
été filtrées. Le dosage des fonctions réductrices
extraites a été réalisé par la technique
du réactif Folin-Ciocalteu. La conversion des
résultats de DO en mg de phénol/g de MS est
rendue possible par la préparation d’une
gamme étalon. Celle-ci a été préparée dans les
conditions identiques à partir d’une solution
standard d’acide tannique (100 mg/mL).
Les composés organiques volatils de l’humus
ont été extraits par hydro-distillation (Dob et
al., 2005). Cinquante grammes (équivalent
sec) d’échantillon frais et 500 ml d’eau ont été
disposés dans un ballon pyrex de 2 000 mL. Le
ballon, relié à une colonne réfrigérante et à un
système de récupération, a été porté à ébullition
pendant 8 heures, en prenant soin de
conserver une température constante. Les
COV, entraînés par la vapeur d’eau et refroidis
dans la colonne réfrigérante, se déposent dans
une colonne annexe pour former une phase à
la surface de l’eau. Cette phase contenant les
COV a été reprise avec 1,5 ml d’hexane et
complètement asséchée par ajout de sulfate de
ecologia mediterranea – Vol. 33 – 2007
Arguments fonctionnels pour la conservation de la mixité forestière méditerranéenne
sodium anhydre (Na 2 SO 4 ). Les extraits sont
conservés à 4 °C jusqu’à l’analyse.
L’analyse des COV contenus dans 0,5 µL
d’extrait (entre 100 et 150 pics par échantillon)
a été effectuée par chromatographie en
phase gazeuse (Chrompack CHROM 3-CP
9001). Le chromatographe est équipé d’un
détecteur à ionisation de flamme et d’une
colonne semi-capillaire à silice fondue de
10 mètres (CP SIL 5CB). Une matrice de données
a finalement été construite en prenant le
temps de rétention comme référence de séparation
des différents composés et en calculant,
à partir des aires de chaque pic, le pourcentage
relatif des différents composés d’un
échantillon. Trente-six terpènes commerciaux
ont été analysés dans des conditions identiques
et ont permis de définir 3 classes de
taille de structures chimiques en fonction de
leur temps de rétention.
Analyses statistiques
Nous avons utilisé une analyse de variance
paramétrique (ANOVA) à un facteur pour tester
les effets du type de peuplement sur les
quantités d’azote in situ et sur les différentes
variables microbiennes (diversités, activité
métabolique globale, ammonification et nitrification
nettes). Les différences, au seuil de
significativité fixé à p < 0,05, entre les
moyennes des peuplements ont été analysées
par le test post-hoc de Duncan. Une régression
linéaire, suivie d’un test de Pearson, a été
utilisée pour mettre en évidence une relation
entre deux variables. Pour toutes ces analyses
paramétriques, nous avons vérifié les conditions
requises de normalité (test de Shapiro)
et d’homogénéité de la variance (test de
Levene). Toutes les analyses ont été réalisées
en utilisant le logiciel Statistica 6.0. Une analyse
de redondance nous a permis d’expliquer
l’influence des profils de COV dans la structuration
fonctionnelle des communautés
microbiennes (CANOCO 4.5). Une étape préliminaire
nous a permis d’extraire mathématiquement
92 COV dont l’influence individuelle
(effet marginal) est supérieure au seuil
fixé à la moyenne des pourcentages de la
variance totale expliquée. À partir de ces
92 composés, une seconde analyse redondante
projette les variables explicatives (COV) de la
structure fonctionnelle microbienne dans un
espace factoriel. Dans ce diagramme, lorsque
deux variables (vecteurs) sont éloignées du
centre, soit elles sont proches l’une de l’autre,
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