Eliana de Almeida Mira de Bona.Pdf - Unioeste

11912012112212312412512612712812913013113213313413513613713813914014114214314414514614714814946realizou-se em rota-evaporador a 40ºC. O extrato obtido foi diluído com água destiladaestéril na proporção de 200 mg.mL -1 e filtrado. Para a obtenção do extrato aquoso, amaceração foi realizada utilizando-se como solvente extrator a água destilada estéril,seguindo o mesmo padrão de proporção, armazenamento e filtragem do extrato etanólico.Uma última filtração a vácuo foi realizada, utilizando uma membrana filtrante comporosidade de 0,45mm. Ambas as soluções foram armazenadas em freezer entre -18ºC e -20ºC.A concentração inibitória mínima (CIM) dos extratos foi determinada pela técnicada microdiluição em caldo com base na metodologia descrita no documento M100-S17 doCLSI (2007), com modificações. As amostras foram crescidas em caldo Brain HeartInfusion (BHI-HIMEDIA) a 36ºC/18 h. Foram preparadas suspensões destas culturas emsolução salina 0,85% até obter turbidez correspondente a 0,5 na escala McFarland (1,5.10 8UFC.mL -1 ). Distribuiu-se em placas de microtitulação de 96 poços, 150 µL de caldoMueller Hinton (MH -HIMEDIA) (2x), 150 µL de extrato (em diluições seriadas entre 100e 0,04 mg. mL -1 a cada linha) e por fim, adicionou-se uma alíquota de 15 µL do inóculo eincubou-se a 36ºC/24 h em condições de aerobiose. Decorrido este intervalo de tempo, foiacrescido em cada um dos poços 20 µLuma solução aquosa de cloreto de trifeniltetrazolium (CTT) a 0,5% e as placas foram re-incubadas por 3h/36 o C. A ausência decoloração vermelha foi considerada prova positiva da ação inibitória do extrato. A CIM foidefinida como a menor concentração do extrato em mg.mL -1crescimento microbiano.capaz de impedir oA concentração bactericida mínima (CBM) foi determinada com base nametodologia de Santurio et al., (2007). A partir dos poços onde não houve crescimentobacteriano visível no teste da CIM, anterior a adição de CTT, foi retirada uma alíquota de10 µL e inoculada, com auxílio de uma micropipeta, na superfície do ágar MH. As placasforam incubadas a 36ºC e após 24h foi definida a CBM como a menor concentração doextrato em estudo capaz de causar a morte do inóculo. Os ensaios de CIM e CBM foramrealizados em triplicata.RESULTADOS