UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO ... - UFRJ

MATERIAIS E MÉTODOS 36DEET (Lasape) para definir as concentrações onde poderia ser traçada a curva de calibração,utilizando o comprimento de onda onde a Lei de Beer fosse seguida.Foi construída uma curva de calibração de 5 pontos e determinada a equação da retaque será utilizada para o cálculo das quantidades incorporadas.4.5 Preparação dos lipossomas.Os métodos de hidratação do filme lipídico e agitação mecânica de um pré-lipossomaforam usados para a preparação dos lipossomas contendo DEET.Buscou-se associar o DEET de caráter lipofílico ao lipossoma aproveitando ascaracterísticas da vesícula lipossomal, que possui na sua membrana uma parte lipídica(fosfatidilcolina e colesterol).4.5.1 Método de hidratação do filme lipídico.Os lipossomas 42 mM de PC e 8,4 mM de DEET foram preparados pelo método dehidratação do filme lipídico (Bargham et al 1974). Foram pesados 1,266 g de Phospholipon®90 NG, 0,243 g de colesterol e 0,070 g de DEET em um balão de fundo redondo comcapacidade para 500 mL. Foram adicionados aproximadamente 10 mL de clorofórmio parasolubilização das substâncias. O balão foi levado ao evaporador rotatório a 90 rpm, sob vácuo,por duas horas, em banho-maria a 60º C. Após este tempo o balão foi deixado em refrigeradorpor 24 horas, sendo colocado no evaporador rotatório por mais 15 minutos para retirarqualquer vestígio do solvente utilizado.Adicionou-se ao balão 50 mL de tampão TRIS (pH = 6,8) e levou-se a agitação emagitador de tubos. Após agitação, deixou-se por mais 24 horas no refrigerador para que ofilme lipídico formado ficasse totalmente hidratado. O balão foi agitado com perolas de vidropor mais 15 minutos com auxilio de um agitador de tubos.A suspensão lipossomal obtida foi submetida a normalização das vesículas formadasem membranas de policarbonato (0,4µm e 0,2µm ) e determinação do pH (FIGURA 6).