UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO ... - UFRJ

MATERIAIS E MÉTODOS 38Pesou-se a quantidade de PHOSAL ® em um becher, a este foi acercesntado aquantidade de DEET de acordo com a proporção estabelecida PC:DEET e misturou-se comum bastão de vidro por 15 minutos, foi adicionado tampão TRIS (pH = 6,8) até completar 25mL e o becher foi deixado sob agitação mecânica por 2 horas (FIGURA 7).Para o preparo dos lipossomas usados como branco, seguiu-se o mesmo procedimento,porém sem a adição de DEET. Os lipossomas assim preparados foram mantidos sobrefrigeração a 4º C até os ensaios de caracterização.1231 – Adição da matéria prima (pré-lipossoma), DEET e tampão TRIS (pH = 6,8).2 - Agitação em agitador magnético (2 horas).3 - Normalização em membrana de policarbonato de 0,4 µm e 0,2 µm.FIGURA 7 – Representação esquemática da formação de lipossomas pelo métododo pré-lipossoma.4.5.3 Separação das frações de ambos os métodos para análiseA suspensão lipossomal formada foi separada (FIGURA 8):1 a fração – solução original.2 a fração – filtrada por membrana de policarbonato com poro de 0,4 µm.3 a fração – filtrada por membrana de 0,2 µm.4 a fração – 2,5 ml do material da terceira fração foram normalizados em coluna PD-10contendo Sephadex® G-25 ou G-50, dependendoda concentração do fosfolipídiousado.