UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO ... - UFRJ

MATERIAIS E MÉTODOS 44Foram feitas leituras dos espectros de varredura, na faixa de 200 – 300 nm, de umasolução, usando o valor de A 1% 1cm, para verificar o melhor comprimento de onda. Paraestes experimentos foi utilizado o DEET sintetizada pelo Laboratório Lasape devido ao graude pureza. O mesmo procedimento foi utilizado para soluções alcoólicas das matérias primase para o DEET usado na produção dos lipossomas.Os lipossomas produzidos foram submetidos a diluições com etanol e foram lidos nocomprimento de onda selecionado para a determinação da melhor relação (PC:DEET).Os lipossomas sem DEET foram diluídos em igual volume de etanol para adeterminação do espectro de varredura no UV.4.7.2 Determinação do tamanho médio dos lipossomasO tamanho médio dos lipossomas foi determinado por espectroscopia de espalhamentoda luz laser com o auxílio do Aparelho ZETASIZER® 3000 HS da Malvem Instruments Ltd.Foram feitas diluições das preparaçoes lipossomais de Phospholipon® e de Phosal® naproporção de 42 mM PC : 8,4 mM de DEET, na concentação aproximada de 1 g/L sendodeterminadas em temperatura de 25º C com ângulo de detecção de 90 º e 290,4 kCps.4.7.3 Visualização dos lipossomas por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET)Para a execução da técnica de coloração negativa foi utilizado o método da gota emtela de cobre com filme suporte de parlódio e carbono, solução aquosa de bacitracina 0,1mg/mL e corante ácido fosfotúngstico, solução aquosa a 2 %, (p/v) neutralizado com soluçãode KOH 1 M.Usou-se uma gota de solução de bacitracina para eliminar as cargas negativasdepositadas sobre o filme de carbono. A gota foi seca com papel de filtro por capilaridade,após 2 minutos. Logo após, uma gota da preparação do lipossoma diluído foi colocado sobre osuporte. Foi feita uma tela para cada amostra, ou seja, lipossoma 42 mM feito com Phosal® eLipossoma 42 mM com Phospholipon® ambos com 20 % de DEET em relação aos lipídios