CamSep 3 S

IMMUNO-CHROMATOGRAFIA - PRZEGLĄD ZASTOSOWAŃ,
STOSOWANYCH IMMUNO-SORBENTÓW I METOD IMMOBILIZACJI
Krystyna GRYGORYSHYN 1 , Marcin M. KAMIŃSKI 2 , Grzegorz BOCZKAJ 1 ,
Mariusz JASZCZOŁT 1 , Marian KAMIŃSKI 1* ,
/chromatografia powinowactwa (AC), chromatografia immuno-powinowactwa
(IAC), przeciwciała monoklonalne, przeciwciała poliklonalne, immobilizacja,
reaktywacja sorbentu/
1 Katedra Inżynierii Chemicznej i Procesowej, Wydział Chemiczny, Politechnika Gdańska,
ul. G. Narutowicza 11/12 80-233 Gdańsk, PL, * markamin@pg.gda.pl,
2 Krebs-Forschung Zentrum, Heidelberg, D, m.kaminski@dkfz.de
Szczególna selektywność, a często wręcz, wysoka specyficzność rozdzielania
z wykorzystaniem chromatografii powinowactwa (Affinity Chromatography (AC)), powoduje, że ta
technika, znajduje szerokie zastosowanie do oczyszczania określonych peptydów i białek,
szczególnie enzymów, w skali preparatywnej, a także procesowej. Z wykorzystaniem specjalnie
przygotowanych sorbentów warstwowych (core surface paricles (CSP)), o ferromagnetycznym
rdzeniu, może być także stosowana jako technika specyficznej sorpcji służąca do wyodrębniania
z przestrzeni bio-rektora, określonych produktów bio-technologii. Chromatografia immunopowinowactwa
(IAC) jest odmianą chromatografii powinowactwa o najwyższej specyficzności.
W pracy, na tle ogólnych zasad przygotowania sorbentu i dokonywania rozdzielania oraz
regeneracji powierzchni sorpcyjnej w chromatografii powinowactwa, zostały przedstawione
techniki „unieruchamiania” (immobilizacji) przeciwciał na powierzchni nośnika. Dokonano
przeglądu najczęściej stosowanych w tym celu nośników oraz metod unieruchamiania przeciwciał
na powierzchni szeroko porowatego „immobilizatora” z zachowaniem specyficznej aktywności
powierzchni sorpcyjnej. Umiejętność zastosowania warunków zapewniających wysoką aktywność
immobilizowanych makromolekuł, ma największy wpływa na uzyskiwanie wysokiej specyficzności
otrzymanego w ten sposób sorbentu. Ogromne znaczenie posiada też umiejętność doboru
optymalnych warunków „odszczepiania” sorbatu, a następnie, odtwarzania jego aktywności
sorpcyjnej.
Przedstawiono przykłady najważniejszych zastosowań poszczególnych odmian
chromatografii powinowactwa oraz immuno-powinowactwa, do otrzymywania określonych
peptydów lub białek w skali preparatywnej lub procesowej. Przedstawiono też perspektywy
dalszego rozwoju różnych odmian chromatografii powinowactwa, w tym szczególnie,
chromatografii immuno-powinowactwa.
16