CamSep 3 S
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
WYKORZYSTANIE TECHNIK CHROMATOGRAFICZNYCH<br />
DO WYODRĘBNIANIA I ANALIZY STRUKTURALNEJ<br />
POLISACHARYDOWYCH SKŁADNIKÓW ŚCIANY KOMÓRKOWEJ<br />
BAKTERII ENTEROCOCCUS FAECIUM<br />
Zbigniew KACZYŃSKI * , Anna BYCHOWSKA, Małgorzata CZERWICKA,<br />
Kinga MARSZEWSKA, Piotr STEPNOWSKI<br />
/sączenie molekularne, chromatografia gazowa/<br />
Katedra Analizy Środowiska, Wydział Chemii, Uniwersytet Gdański, ul. Sobieskiego 18/19,<br />
80-952 Gdańsk, * e-mail: zbyszek@chem.univ.gda.pl<br />
Bakterie z rodzaju Enterococcus stanowią naturalną jelitową florę bakteryjną każdego<br />
człowieka. W ciągu ostatnich 20 lat drobnoustroje te stały się jednym z wiodących czynników<br />
zakażeń szpitalnych, wywołujących m.in. zakażenia układu moczowego, zapalenie wsierdzia,<br />
zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych, czy też bardzo niebezpieczne zakażenia krwi (posocznice).<br />
Leczenie tych infekcji jest bardzo skomplikowane, gdyż enterokoki wykazują silną oporność<br />
na szereg antybiotyków, w tym również na tzw. antybiotyki ostatniej szansy – wankomycynę<br />
i teikoplaninę.<br />
W obliczu wciąż narastającego zagrożenia ze strony omawianych bakterii oraz mało<br />
skutecznej terapii antybiotykowej zaistniała konieczność opracowania szczepionki przeciwko tym<br />
patogenom. Doniesienia naukowe pokazują, że większość skutecznie działających szczepionek<br />
wykorzystywanych w zwalczaniu różnych zakażeń bakteryjnych otrzymano w oparciu o ich<br />
polisacharydowe składniki ściany komórkowej. W celu opracowania szczepionek przeciwko<br />
enterokokom niezbędne jest wyizolowanie i określenie struktury chemicznej w/w polisacharydów.<br />
W badaniach tych z kolei wysoce użyteczne są różnego rodzaju techniki chromatograficzne, takie<br />
jak sączenie molekularne i chromatografia gazowa.<br />
W prezentowanym komunikacie przedstawiono etapy procesu wyodrębniania i analizy<br />
strukturalnej polisacharydowych składników ściany komórkowej bakterii Enterococcus faecium,<br />
szczepu U0317. Komórki bakteryjne poddano trawieniu enzymatycznemu (lizozym, mutanolizyna,<br />
DNA-za, RNA-za, proteinaza K), a wyodrębnioną mieszaninę polisacharydów rozdzielano przy<br />
pomocy sączenia molekularnego na złożu Bio-Gel P-100. Na podstawie uzyskanego<br />
chromatogramu wyodrębniono kilka frakcji polisacharydowych, dla których zarejestrowano widma<br />
1 H-NMR (magnetyczny rezonans jądrowy). W oparciu o uzyskane widma wyselekcjonowano<br />
materiał, dla którego przeprowadzono badania strukturalne. W celu określania struktury chemicznej<br />
wyizolowanego polisacharydu wykorzystano: GC-FID, GC-MS oraz NMR.<br />
45
Change language