Biochemiepraktikum

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Biochemie Praktikum: Proteinchemie
Gelzubereitung:
Trenngel
8% 10% 12%
H 2 O 4,6ml 4ml 3,3ml
30% Acrylamid 2,7ml 3,3ml 4,0ml
Trenngelpuffer 2,6ml 2,6ml 2,6ml
10% APS 100µl 100µl 100µl
TEMED 6µl 4µl 4µl
Sammelgel
5%
H 2 O
1,7ml
30% Acrylamid 430µl
Sammelgelpuffer 350µl
10% APS 25µl
TEMED 3µl
Durchführung:
1. Zwei unterschiedliche Glasplatten werden mittels Abstandhalter (Spacer)
zusammengesetzt.
2. Die Trenngellösung wird entsprechend obenstehendem Rezept angerührt und zwischen
die Glasplatten gegossen (bis 2 cm unter den Rand) und bis zur Polymerisation mit
Isopropanol oder Wasser überschichtet (vermeidet die Ausbildung von Blasen sowie
das Austrocknung des Gels, dadurch wird eine möglichst ebene Grenzfläche zum
Sammelgel erhalten).
3. Nach der Polymerisation wird die überstehende Flüssigkeit entfernt.
4. Danach wird das Sammelgel aufgetragen und ein Plastikkamm in die
Sammelgelschicht eingesetzt. Dadurch bilden sich Taschen zum Auftragen der
Proteinproben.
5. Nach der Polymerisation wird vorsichtig der Kamm herausgezogen und das Gel mit
der kompletten Halterung inklusive Elektroden in eine Pufferkammer eingesetzt.
6. Beide Pufferkammern (innen und außen) werden mit Elektrophoresepuffer befüllt.
7. Proteinproben und Proteinstandard in Probentaschen auftragen:
a. Vorbereitung der Proben:
i. - Protein-Konzentration der LDH-Proben bestimmen.