Biochemiepraktikum
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PCR ahmt die zelluläre DNA-Synthese im Reagenzglas nach. Durch mehrfache Wiederholung<br />
der Reaktion kann das definierte DNA Fragment amplifiziert werden. Man braucht folgende<br />
Komponenten.<br />
DNA-Polymerase<br />
dNTPs (Gemisch aus dATP, dGTP, dTTP, dCTP)<br />
Doppelsträngige DNA Matrize<br />
2 Primer<br />
Puffer<br />
Mg 2+ -Ionen<br />
Zur PCR wird ein wiederholter thermischer Reaktionszyklus durchlaufen. Das amplifizierte<br />
DNA-Fragment wird durch die verwendeten Primer definiert. Abb. 2.<br />
1. Denaturieren: Trennen der DNA Matrize in Einzelstränge über 94°C<br />
2. Anlagerung: „Annealing“ der Primer an beiden einzelsträngigen Matrizen<br />
Annealing Temperatur 45°C-65°C<br />
Errechnen: G-C Paare = 4°C; A-T Paare = 2°C<br />
3. Synthese: 75°C<br />
Abb.2: Schema PCR<br />
Durchführung:<br />
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