Biochemiepraktikum
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Biochemie Praktikum: Proteinchemie<br />
Versuchsdurchführung:<br />
Zur Ermittlung der MICHAELIS-MENTEN Kinetik der LDH für das Coenzym NADH/H +<br />
misst man die Enzymaktivität analog dem LDH-Test, allerdings mit unterschiedlicher<br />
NADH/H + -Konzentration.<br />
Der Test wird in 1 ml Plastikküvetten am Eppendorf-Photometer bei 366 nm und<br />
Raumtemperatur durchgeführt.<br />
Die Testlösung enthält: 67 mM Phosphatpuffer pH 7.2 950 µl<br />
Pyruvatlösg (2.75 mg/ml) 20 µl<br />
Enzymlösg. (25 µg/ml) 10 µl<br />
NADH-Lösg. aus Verdünnungsreihe 20 µl<br />
Stammlösung vorbereiten: 67 mM Phosphatpuffer pH 7.2 9.5 ml<br />
Pyruvatlösg (2.75 mg/ml) 200 µl<br />
Enzymlösg. (25 µg/ml) 100 µl<br />
Start der Reaktion durch Zugabe der NADH-Lösung.<br />
Verdünnungsreihe:<br />
NADH-Stammlösg: 15,5 mM (11 mg/ml)<br />
Verdünnungsfaktor: 1 2 4 8 10 20 30 40<br />
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Schreiberempfindlichkeit<br />
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NADH-Konz. [mM]:<br />
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NADH-Konz. im Test [mM]:<br />
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Reaktionsgeschw. V [U/ml]: