Biochemiepraktikum

C) Gießen von CM-Agarplatten:
Für die 3 Transformationen wird synthetisches Selektionsmedium ("CM, complete medium")
gebraucht, dem jeweils unterschiedliche Komponenten (Leucin, Uracil oder Histidin) fehlen.
(Für alle Gruppen zusammen reicht ein Satz Platten von jedem Typ.)
CM-Platten:
Trp)
6,7 g/l Yeast-Nitrogen-Base without amino acids
2 g/l "drop-out mix" (enthält u. a. alle Aminosäuren außer His, Leu, Lys,
2% D-Glucose
2% Agar
Supplemente (s. u.)
Das Medium wird gemischt aus 300 ml 2x CM, 30 ml 40 % Glucose und 300 ml 4 % Agar;
Die Supplemente werden je nach gewünschter Selektion aus Stocklösungen zugegeben:
30 mM Ade 20 mM Ura 100 mM Leu 60 mM His 100 mM Lys 40 mM Trp
Leu-: 6 ml 6 ml - 3 ml 6 ml 6 ml
Ura-: 6 ml - 10 ml 3 ml 6 ml 6 ml
His-: 6 ml 6 ml 10 ml - 6 ml 6 ml
- Flasche mit 4%igem Agar öffnen, Deckel lose auflegen
- Agar in Mikrowelle vollständig aufschmelzen, Vorsicht, kocht leicht über!
- 2x CM vorsichtig zum geschmolzenen Agar geben, mit sterilem Messzylinder 30 ml
40%ige Glucoselösung und mit Glaspipetten die Supplemente zugeben
- Flasche verschließen und durch Rollen vorsichtig mischen, dabei Schaumbildung
vermeiden!
- je ca. 25 ml in sterile Petrischalen gießen
- eventuelle Schaumblasen mit dem Brenner (kurz!) zum Platzen bringen
- Agar ca. 15 min bei halbgeschlossenem Deckel erkalten lassen, dann Deckel schließen
- Agarflaschen gleich ausspülen!
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