Biochemiepraktikum

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Biochemie Praktikum: Proteinchemie
I. Erstellen einer Eichgerade für eine Proteinbestimmung nach
Bradford:
Um die ermittelten Extinktionswerte einer Proteinkonzentration c zuweisen zu können, muß
eine Eichgerade erstellt werden. Dazu nimmt man eine Rinderserumalbuminlösung (BSA-
Lsg.) bekannter Konzentration (1 mg / ml) und mißt die Extinktionswerte verschiedener
Verdünnungen dieser Lösung. Durch Auftragen der Proteinkonzentrationen gegen die
zugehörigen Extinktionswerte erhält man die Eichgerade.
Die Verdünnungsreihen werden in 1,5ml Eppendorf-Gefäßen („Eppis“) vorbereitet.
Gemessen wird bei 595 nm. Vor Beginn der Messung wird das Spektrometer mit 1 ml
Bradford-Stammlösung + 100 µl H 2 O auf 0 gestellt.
Von den Verdünnungen werden nun jeweils 100µl zu 1ml Bradford-Stammlösung (vorgelegt
in Küvetten) gegeben. Die Küvetten mit Parafilm abdichten, gut vermischen, 10 min
inkubieren und anschließend messen.
Proteinverdünnungen zur Ermittlung der Eichgerade (2 mal unabhängig voneinander ansetzen
und messen):
Konz. c
[µg/ml]
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
µl H 2 O 1000 990 980 970 960 950 940 930 920 910 900
µl BSA
(1 mg/ml)
Extinktion
1. Messung
Extinktion
2. Messung
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Auswertung:
Erstellen der Eichgeraden auf Millimeterpapier:
Extinktion
Konzentration [ µg / ml ]