Optimierung verschiedener chromatografischer Trennverfahren fÃ¼r ...

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Fachhochschule Darmstadt Seite 26 von 35Fachbereich Chemie- und BiotechnologieErgebnisKaffee vom MetzgerKaffee aus Mensa BistroKaffee aus Mensa AutomatEmmi Caffe Latte EspressoCoca ColaGrüner TeeRed BullKaffee BäckerNescafe CappuccinoEspresso498 ppm295 ppm609 ppm578 ppm94 ppm70 ppm317 ppm491 ppm500 ppm2072 ppmMeßmer schwarzer Tee (1 Beutel = 1,75 g):Ziehzeit 0,5 min 71 ppm1 min 136 ppm2 min 204 ppm3 min 278 ppm5 min 338 ppm10 min 368 ppmgleiche Menge Jacobs Privat Kaffee7,5 min 159 ppmAbhängigkeit des Coffeingehalts von der Ziehzeit400350Konzentration [ppm]3002502001501005000 2 4 6 8 10 12Ziehzeit [min]Meßmer Schwarzer TeeKaffeeAbbildung 16: Abhängigkeit des Coffein-Gehaltes in schwarzem Tee von der ZiehzeitAriane Haasis, Stefan Hennen
Fachhochschule Darmstadt Seite 27 von 35Fachbereich Chemie- und BiotechnologieArbeitsvorschrift zur Bestimmung von Coffein in GetränkenVorbereitung des EluentenDer Eluent (ca. 1 Liter) wird in dem vorgegebenem Verhältnis von Methanol:Wasser 40:60durch Mischen der einzelnen Lösungsmittel hergestellt. Die Mischung wird zunächst übereinen Membranfilter (0,45 µm) filtriert und anschließend in die Vorratsflasche gegeben.Zur Filtration wird die entsprechende Absaugeinrichtung verwendet. Der Membranfilter wirdzwischen Trichter und Boden gelegt und der Trichter mittels der Klemme fixiert.Wasserstrahlpumpe aufdrehen und dann den Vakuumschlauch an die Saugflascheanschließen. Es werden zunächst nur ca. 50-100 ml Eluent zum Spülen von Trichter undSaugflasche filtriert und anschließend verworfen. Vor dem Abfüllen wird auch dieVorratsflasche mit einer kleinen Portion filtriertem Eluenten gespült.Der Eluent wird nun in der Vorratsflasche im Ultraschallbad für 5 Minuten entgast.Inbetriebnahme der HPLC-Anlage• Fluss auf 0 ml/min einstellen (Anzeige 00 im schwarzen Auswahlfeld)• Pumpe und Detektor einschalten (jeweils hinten links)• Ventil öffnen (gegen den Uhrzeigersinn) damit der Eluent ablaufen kann• Pressure Limit LOWER auf 0• Pressure Limit MAX auf 180 kg/cm² (Maximalbelastung der Säule)• Eluentenmenge im Vorratsgefäß überprüfen• Abfallgefäß prüfen, ob ausreichend Platz vorhanden ist• Pumpe mit orangem Start-/ Stop-Taster aktivieren (Leuchtdiode leuchtet, wenn aktiv)• Fluss von 1,0 ml/min wählen• Warten bis austretender Eluent gleichmäßig tropft• Ansaugleitung auf Luftblasen prüfen, warten bis keine mehr vorhanden sind)• Pumpe Fluss: 0 ml/min• Ventil im Uhrzeigersinn schließen• Pumpe in 0,1 ml/min Schritten (etwa alle 10 Sekunden) hochfahren bis zumgewünschten Fluss (1,0 ml/min)• Vor Analysenbeginn Säule ca. 15 Minuten einspülen• Einstellen der Wellenlänge am Detektor mit dem schwarzen Drehknopf (273 nm);Vorsicht: Wellenlänge während der Messung auf keinen Fall verstellen (Verfälschungder Ergebnisse)Einschalten des Integrators• Integrator einschalten (weißer Kippschalter oben rechts)• Drücken der Taste PARAM FILE• Auswahl von EDIT mit Pfeiltasten (oben rechts) und bestätigen mit ENTER• Eingabe des Datenfiles (7) und bestätigen mit ENTER (1 Sekunde kräftig drücken)• Im Display muss unter FILE 7 angezeigt werden. Wenn nicht: ausschalten und ProzedurwiederholenAriane Haasis, Stefan Hennen
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