Optimierung verschiedener chromatografischer Trennverfahren fÃ¼r ...

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Fachhochschule Darmstadt Seite 30 von 35Fachbereich Chemie- und BiotechnologieVersuche zur Kombinatorischen ChemieAufgabeIm Organischen Fortgeschrittenenpraktikum an der FH Darmstadt gibt es einenModellversuch zur Kombinatorischen Chemie. (Es werden die Aminosäuren L-Alanin (Ala)und L-Phenylalanin (Phe), deren Säuregruppen an ein polymeres Trägerharz gebundenwerden, mit Phenylisocyanat (Phen) bzw. 3-Chlorphenylisocyanat (Clphen) derivatisiert.) DerVersuch wurde im Rahmen der Diplomarbeit von Jürgen Blücher erarbeitet und mehrfach imRahmen von Fortbildungsveranstaltungen bei der Firma Provadis erfolgreich durchgeführt.Die Analyse der Produkte erfolgte dort mit Hilfe der HPLC unter Anwendung einerGraduenten-Elution. Die apparativen Gegebenheiten sind dazu an der FHD derzeit noch nichtgegeben. Deshalb sollte erprobt werden, ob nicht schon mit einer DC oder einfachen HPLCeine Analytik möglich ist, damit der Versuch für die Studierenden keinen (unbefriedigenden)Black-Box-Charakter hat.Geräte4x 5ml-Einwegspritzen mit VerschlusskappenBechergläser, verschiedene Größen4x in die Spritzen passende Frittenauf die Spritzen passende NadelnAnalysenwaageChemikalienHarz „Rink- Amide MBHA resin“ der Firma Nova- BiochemDimethylformamid, über Molekularsieb getrocknetPiperidin, 30% im DMFDichlormethn, über Molekularsieb getrocknet1-HydroxybenzotriazolFMOC-AlaninFMOC-PhenylalaninN-EthyldiisopropylaminN,N-DiisopropylcarbodiimidPhenylisocyanatChlorphenylisocyanatTriflouressigsäureAcetonitrilAriane Haasis, Stefan Hennen
Fachhochschule Darmstadt Seite 31 von 35Fachbereich Chemie- und BiotechnologieDurchführung• Harz-EinwaageDie Spritzen werden mit einem Frittenboden versehen und dann jeweils ca. 50 mgHarz eingewogen. Anhand dieser Einwaage können alle weiteren Einwaagenberechnet werden. (Die grauen Felder sind berechnet, die hellen vorgegeben.)SpritzeEinwaageHarz [g]Beladung[mmol/g] Ala [mg] Phe [mg] Phen [µl]Clphen[µl]Ala – Phen 0,050 0,57 8,9 - 15,4 -Ala – Clphen 0,052 0,57 9,2 - - 18,1Phe – Phen 0,050 0,57 - 11,0 15,4 -Phe – Clphen 0,054 0,57 - 11,9 - 18,81- Hydroxybenzotriazol[mg]N- Ethyldiisopropylamin[µl]4,8 9,7 4,45,0 10,1 4,64,8 9,7 4,45,2 10,5 4,8N,N- Diisopropylcarbodiimid[µl]M [mg/mmol] Dichte [mg/µl]Ala 311,34Phe 387,45Phen 119,12 1,1Clphen 153,57 1,261-Hydroxybenzotriazol 135,13N-Ethyldiisopropylamin 129,25 0,76N,N-Diisopropylcarbodiimid 126,20 0,81• Quellen der HarzeIn jede Spritze werden 2-3 ml Dimethylformamid (DMF) aufgezogen. Die Spritzenwerden zehn Minuten geschüttelt, dann zwanzig Minuten stehen gelassen und nochmal kurz kräftig geschüttelt bevor die Spritzen ausgedrückt werden.• Abspaltung der Harz-SchutzgruppeIn jede Spritze wird 1 ml Piperidin- Lösung aufgezogen, die Spritzen für zehn Minutengeschüttelt und die Reaktionslösung wieder ausgedrückt.Zum Waschen werden zweimal je 3 ml DMF aufgezogen, die Spritze geschüttelt undwieder ausgedrückt. Danach werden dreimal je 2 ml Dichlormethan in die Spritzegezogen, kurz kräftig geschüttelt und ebenfalls wieder ausgedrückt.• Aktivierung und Ankopplung von Alanin bzw. PhenylalaninSeparat dazu werden in vier Schnappdeckelgläser 1-Hydroxybenzotriazol eingewogen.In zwei Gläser kommt zusätzlich das FMOC-Phenylalanin, in die beiden anderen dasFMOC-Alanin. Zusätzlich werden in jedes Gläschen 600 µl DMF und N-Ethyldiisopropylamingegeben. Die Gläschen werden im Gefrierfach auf 0 bis 3 °C abgekühltbevor N,N-Diisopropylcarbodiimid zugegeben und die Lösung in die SpritzenAriane Haasis, Stefan Hennen
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