Belastungsinduzierte Veränderungen von Thrombozyten ...

Diskussion
dass die Unterschiede zwischen den einzelnen Leukozytensubpopulationen in ihrer Neigung
zur Konjugatbildung in der Auswertung der MFI für CD41-PE stärker zu Tage traten, als dies
in der Auswertung nach % positiven Zellen zuvor zu erwarten gewesen war. Die überpro-
portional hohe MFI für CD41-PE, wie sie vor allem für die Monozyten beobachtet werden
konnte, beruht darauf, dass ein weißes Blutkörperchen gleichzeitig mehrere Thrombozyten
binden kann. Entsprechend geht eine größere Neigung zur Konjugatbildung neben einem
höheren Anteil an Konjugaten in der Auswertung nach % positiven Zellen auch mit einer
Zunahme der Konjugatgröße durch Anlagerung mehrerer Thrombozyten einher. Bereits in
einer der ersten Arbeiten zur Bildung von Konjugaten in vitro beschrieben JUNGI et al. nach
der mikroskopischen Untersuchung einer gemischten Lösung aus isolierten Leukozytensubpopulationen
und mit Thrombin stimulierten Thrombozyten die Entstehung sogenannter
Rosettenformen, bestehend aus einem zentralen weißen Blutkörperchen und einem Ring von
angelagerten Blutplättchen (160). Vor Einführung durchflusszytometrischer Analysen bestand
die Quantifizierung der Konjugate in der mikroskopischen Handauszählung solcher
Rosettenformen. Abbildung 34 zeigt eine eigene
fluoreszenzmikroskopische Aufnahme eines einzelnen
Leukozyten mit mehreren adhärenten Thrombozyten.
Abbildung 34:
Fluoreszenzmikroskopische Aufnahme eines Leukozyten
(CD45-FITC, grün) mit mehreren anheftenden Thrombozyten
(CD41-PE; orange) in typischer Rosettenformation
(Vergrößerung 630-fach)
In einer späteren Folgestudie, die über den Rahmen der vorgelegten Arbeit hinausgeht, wurde
die Methodik unter Verwendung eines Cytomics TM FC500 Durchflusszytometers (Beckman
Coulter) auf eine 5-Farben-Analyse ausgebaut (138). Nach Durchführung eines erneuten 90-
Sekunden Tests (all out) konnten die Ergebnisse von Teilstudie III reproduziert werden und es
zeigte sich, dass bevorzugt junge Monozyten (CD14 + 16 - ) gegenüber reiferen Monozyten
(CD14 + 16 + ) zur Konjugatbildung neigen und dass diese Konjugate die höchste Expression für
CD62P aufweisen. Durch eine zusätzliche Stimulation mit TRAP-6 ließ sich die Konjugatbildung
nach Belastung weiter verstärken. Eine vermehrte Bildung von Konjugaten nach
einem Stufentest und einer Dauerbelastung von 90 % der IAS fand sich später auch für
Patienten mit einem Diabetes mellitus Typ II sowie einer gesunden Kontrollgruppe (137).
Auch nach Dauerbelastungen von 80 % und 100 % der IAS bei untrainierten Normalpersonen
105